[blot전기영동 방법]전기영동에 의한 미생물의 분리

소개글

레포트 쓰실때 도움이 되셨음 해요..^^

목차

1.Blotting이란

2. Southern Blot
- Southern Blot 의 순서
-Agarose gel로부터 solid support로 DNA의 이동 방법
(모세관 현상을 이용한 이동(Capillary transfer) ,
전기장을 이용한 이동(Electrophoretic transfer) ,
진공을 이용한 이동(Vacuum transfer) ,

3.Western Blot
-Western Blot의 원리
-실험 방법

4. Northern Blot
-목적
-실험방법

본문내용

1.Blotting이란
전기영동된 폴리아크릴아마이드 젤 상의 단백질을 nitrocellulose 막으로 이동(blotting)시키는 것을 말한다. 젤 상에 전개된 단백질을 고형 지지체(solid suport) 상으로 이동시켜야 하는데, Western blot 분석법에서 사용되는 지지체로는 nitrocellulose 막이 실험하기가 간편하고 실험 결과도 우수하여 흔히 사용되고 있다. 젤 상에서는 단백질 찢어지기도 쉽고 나머지 실험을 수행하기에 어려움이 많기 때문에 nitrocellulose막으로 이동시킨다.
전기영동이 끝난 후 SDS-PAGE 젤과 같은 크기로 1장의 nitrocellulose 막과 6장의 도화지(Whatman 3MM종이가 좋지만 도화지도 상관없다.)를 준비한다. 이때 손에 묻은 기름이나 분비물이 단백질의 이동을 방해 할 수 있으므로 반드시 장갑을 착용한다. 그리고 이 준비한 nitrocellulose 막을 막내에 공기방울이 없이 완전히 적셔지도록 증류수에 담근다. 또한 6장의 도화지도 완충액에 담근다. 그리고, 아래의 순서대로 설치하여 transfer한다.
(-)전극판-porous pad-도화지-nitrocellulose filter-gel-도화지-porous pad-(+) 전극판
이때 상하좌우를 표시하기 위해 nitrocellulose 막을 떼어낸 후 한쪽 귀퉁이를 조금 자른다.
다 이동되었는지 확인을 하기 위해서는 젤을 Coomassie Brilliant Blue로 염색하여 본다. protein 없는 부분은 destaining 되므로 구별이 된다. 만약 coomassie 염색이 잘 안 되었다면 추출을 잘 못했던지, 혹은 양이 적었다는 것이다.

참고 자료

없음