제한효소지도 실험보고서

목차

Ⅰ. 목적

Ⅱ. 이론
1. Restriction Enzyme
2. Restriction Enzyme Map
3. Plasmid
4. DNA Gel Electrophoresis

Ⅲ. 결과
1. 예비실험결과
2. 전기영동 결과

Ⅳ. 고찰

Ⅴ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 목적
1. 제한효소의 특성을 이해하고 전기 영동법을 이용하여 제한효소지도 작성을 해본다.

Ⅱ. 이론
1. Restriction Enzyme
자연 상태에 있는 대부분의 DNA 분자들은 너무 커서 실험실에서 다루거나 분석하기가 쉽지 않다. 예를 들면, 염색체는 수천 개의 유전자를 가지고 있으며, 100Mb 이상의 긴 단일 DNA 분자이다. DNA에 존재하는 각각의 유전자나 각 부위를 연구하려면 커다란 세포 DNA를 다룰 수 있는 크기로 쪼개야 한다. 이때 제한효소를 사용한다. 제한효소는 특정한 염기서열을 인지하여 특정자리만 선택적으로 절단하는 핵산분해효소들이다. 대부분의 클로닝 벡터는 특별한 크기의 범위에 속하는 DNA 단편을 선호한다. 예를 들면, 플라스미드에 기초한 벡터는 8kb 이상의 길이인 DNA 분자를 클로닝하는 것은 비효율적이다.

분자생물학에 사용되는 제한효소들은 전형적으로 항상 회문(palindrome)서열인 4-8bp의 짧은 표적서열을 인지하여 이 서열 내의 정해진 위치를 자른다. 널리 사용되는 제한효소인 EcoRⅠ은 5’-GAATTC-3’ 서열을 인지하여 자른다.

<중 략>

Ⅳ. 고찰
이번 실험으로 제한효소의 기능과 vector에서 제한효소 자리를 mapping할 수 있는 것을 알아보았다. 실험결과를 통해 각각의 제한효소가 자른 단편의 크기들이 다른 것으로 보아, vector 위에 각 제한효소에 해당하는 특정 위치의 제한효소 자리가 있는 것을 알 수 있다. 또한 제한효소 1개를 처리했을 때 단편 수가 1개 밖에 나오지 않은 것으로 보아, 각각의 제한효소의 제한자리가 vector위에 1군데만 존재하는 것을 알 수 있다. 이번 실험에 사용한 pBluescript KS(+)는 문헌상으로 알려진 분자량이 2958bp이다. 따라서 제한효소 1개를 처리한 후 분자량을 측정했을 때 원형에서 선형으로 DNA의 구조가 변했을 뿐 분자량은 달라지지 않기 때문에 Uncut과 제한효소 1개를 처리한 DNA의 분자량은 2958bp가 나와야 하는 것으로 추측할 수 있다.

참고 자료

James D, Watson 외 5명, 양재섭 외 14명 역, 「왓슨 분자생물학 7판」, ㈜바이오사이언스, 2014, P62-63, 148-149
T.A. Brown, 이병무 외 3명 역, 「유전자 클로닝과 DNA 분석 7판」, 월드사이언스, 2017, P13-14, 58
https://www.snapgene.com/resources/plasmid-files/?set=basic_cloning_vectors&plasmid=pBluescript_KS(%2B)