[인천대 생명공학실험3 A+] 단백질 분리정제 실험결과 보고서 [His-tag(히스택), Imidazole, 친화크로마토그래피]

소개글

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 단백질 분리정제 실험결과 보고서 [His-tag(히스택), Imidazole, 친화크로마토그래피] 실험결과 보고서 입니다.
친화 크로마토그래피, His-tag, 배위결합 및 용리조건 디자인, Fusion tag 종류와 장단점, Lysozyme, Dialysis bag, Imidazole에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials & Methods
6. Result
7. Discussion
8. Conclusion
9. Reference

본문내용

3. Purpose
Cell lysis를 통해 얻은 여러 단백질을 용리조건을 디자인하고 친화 크로마토그래피를 이용해 His-tag이 달린 eGFP만 분리정제한다.

<중 략>

5. Materials & Methods
세포용액 sample, Lysis buffer, Lysozyme, Wash buffer, Elution buffer, Ni-NTA column, 고속원심분리기, 초음파장치, Icemaker, 냉장고, 교반기, tMethods
Cell lysis: 얼음에서 15분 Incubation하며 푼 pellet을 Lysis Buffer 5mL로 pipetting. Lysozyme 50µL 넣어주고 30분간 얼음에서 Incubate. Sample을 초음파 분쇄(Amp 28%, 4min, 5sec on/off). 50mL tube에 옮기고 12,000rpm, 10min으로 원심분리. 상층액 50mL tube에 모음. His-tag purification: Ni-NTA bead vortexing. Ni-NTA slurry(1ml bed vol) 2mL column에 담음. 상층액 제거 후 Lysis buffer를 2ml 첨가하고 inverting. Lysis로 얻은 sample 5mL과 bead를 rotary shaker(200rpm, 4℃, 60분)로 섞음. Lysate-Ni-NTA을 column에 넣고 밑에 캡을 염. 위의 뚜껑을 열고 떨어지는 용액을 모아 sampling. Wash buffer 5ml로 wash 2번. (1st wash sample, 2nd wash sample) Elution buffer를 1ml씩 4번에 첨가해 elution. Ni-NTA column은 0.5M NaOH 1mL로 30분 세척 후 30% 에탄올로 보관. Elution된 용액은 dialysis bag에서 dialysis, overnight로 진행.ube, dialysis bag, 집게, pippet

참고 자료

Joanne et al., 미생물학(2016), 라이프사이언스, p 203, 205, 301-304
JAMES G. et al., Microbiology a laboratory manual 6th, PEARSON p.112-114, 297-299
Dean R. et al., 생화학 개념과 응용(2017), 라이프사이언스, p36, 41, 68-69