약대 실습 ( 동물세포 배양, 셀카운팅)

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<동물세포 배양 방법>

① 동결세포의 해동 : 동물세포 배양을 시작하는 첫 단계로서 세포를 녹여 생명활동을 다시 시작하는 단계

(i) 액체 질소 탱크(-170℃)에서 세포들을 꺼내 37℃에 1분 정도 둔다.
주의) 동결 보존된 동물세포는 이미 상당한 손상을 받았으므로 세포를 해동할 때 충격을 많이 주면 동물세포가 변형되거나 죽을 수 있음
(ii) 거의 녹았을 때 세포 배양액을 10배 정도 투여해 DMSO를 희석한다.
(iii) 가볍게 원심분리한 후 상층액을 제거한다.
(iv) 다시 세포 배양액을 넣고 편평 배지 위에 뿌려준다.
(v) 1시간 이상 경과 후 세포가 바닥에 부착하면 5%의 인큐베이터에서 배양한다.

세포 배양을 위해서는 먼저 동물로부터 특정한 조직을 떼어내고, 이 조직을 잘게 부순 다음, 단백질 분해효소를 이용하여 세포와 세포를 연결해주는 결합단백질을 파괴하여 서로 서로 잘 분리된 세포 현탁액을 준비한다. 그 후 이 세포 현탁액을 적절한 배지에 넣어 주어 세포를 배양하면 된다. 세포 배양에 사용되는 배지에는 KCl, NaCl, Na3PO4, CaCl2, MgSO4, 등과 같은 염류 (salts)와 glucose, vitamins, amino acids, sodium pyruvate등과 같은 영양분, 그리고 pH7의 중성용액상태를 유지해주는 완충용액을 넣어주어야 한다.

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