Lowry protein assay (단백질 정량 분석) 실험-결과레포트 [A+]

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result & Discussion
4. Conclusion

본문내용

1. Abstract

이번 실험은 Lowry 법을 이용하여 다양한 농도를 가진 단백질 시료 용액을 정량하는 실험이다. 먼저 희석시킨 다양한 농도의 BSA용액 5개와 미지 농도의 BSA용액 1개에 Lowry Reagent와 Folin Reagent 를 순서대로 넣고 기다린 뒤 각 용액의 색의 변화를 관찰한다. 그리고 UV/Vis spectrophotometer를 이용해 파장에 따른 흡광도를 측정해 최적의 파장대를 찾고, 이 파장대에서의 각 용액의 흡광도를 측정한 뒤 BSA Standard Curve를 그린다. 이 그래프의 직선의 방정식을 이용해 미지농도 용액의 단백질 시료의 농도를 계산한다. 또한 용액의 색의 진하기와 단백질 농도, 흡광도가 어떠한 관계를 가지는지 분석한다.

2. Experiment

이번 실험에 사용될 시약은 Lowry Reagent, Folin & Ciocalteu‘s Phenol reagent (이하 Folin reagent), 증류수, BSA 원액이다.
전체적인 실험의 방법은 다양한 농도의 단백질 용액에 Lowry reagent를 넣고 20분 동안 반응시킨 후, Folin reagent를 넣고 30분 동안 반응시키며 색의 변화를 관찰한다. 그리고 각 용액의 흡광도를 측정해 가장 높은 흡광도를 보이는 파장을 찾으면 된다.

<중 략>

3. Result & Discussion

Table 1.을 통해서 파악한 최적의 파장대인 750nm 에서 각각 다른 농도의 샘플 용액의 흡광도를 측정한 결과가 Table 2. 에 나와 있다. 이 때, 750nm 에서 샘플 용액의 흡광도가 가장 높게 나온 이유는 용액의 색이었던 자색 (보라색)이 흡수하는 파장대가 750nm 이기 때문이고, 또한 우리가 실험하는 단백질 시료의 크기가 750nm 의 파장대에서 최적으로 나타나기 때문이다. Table 2.에서의 각 샘플용액의 흡광도를 이용해 BSA standard curve를 그릴 수 있다.

참고 자료

2018년도 2학년 2학기 실험노트
단백질 정량 실험 예비레포트
분석화학, 제 8판, Daniel C. Harris, 자유아카데미, page 439