Lowry protein assay (단백질 정량 분석) 실험-예비레포트 [A+]

목차

1. 실험 목적

2. 바탕 이론
(1) 단백질 정량 분석
(2) UV method
(3) Lowry method
(4) BCA method
(5) Bradford method
(6) UV/Vis spectrophotometer
(7) BSA(Bovine Serum Albumine)
(8) error bar

3. 실험 기기 및 시약

4. 실험 방법

본문내용

1. 실험 목적

UV법, Lowry법, BCA법과 Bradford법 등의 다양한 단백질의 정량을 분석하는 방법들에 대해 이해하고, Lowry method를 이용하여 다양한 농도의 단백질 시료를 정량해본다. 또한 UV/Vis spectrophotometer의 이용 방법에 대해 숙지하고 이를 이용해 단백질 용액의 흡광도를 측정해본다.

2. 바탕 이론

(1) 단백질 정량 분석
정량 분석은 물질을 구성하는 성분들 간의 양적 관계를 명확하게 하는 분석법이다. 먼저 물질의 구성 성분을 알아내는 정성 분석을 한 뒤에 정량 분석을 실행한다.
단백질 정량 분석은 시료나 용액 안에 포함된 단백질의 양이나 농도를 구하는 과정으로, 아미노산과 펩타이드 결합의 특성을 이용한다. UV법, Lowry법, BCA법과 Bradford법 등 단백질의 농도를 구하는 방법은 다양하다.

(2) UV method
UV method는 방향족 아미노산인 Phe, Tyr, Trp를 이용해 280nm의 파장에서 최대 흡광도를 가짐을 이용한 방법으로, 시약을 사용하지 않고 단백질 시료의 흡광도를 바로 측정하여 단백질을 정량하는 방법이다.
방향족 아미노산인 Aromatic R groups (Phe, Tyr, Trp)는 280nm의 자외선을 흡수한다. 280nm 에서의 흡광도는 단백질의 농도에 비례하며, 단백질의 양을 0.05~1mg/ml 범위만큼 측정할 수 있다. UV method는 실험 과정이 빠르고 단백질의 변성이 없다는 특징이 있다. 또한 buffer, salt, 퓨린, 피리미닌, 핵산 등의 영향을 받으며 단백질들의 아미노산 조성에 따라 결과 값이 달라진다. UV method의 장점은 매우 낮은 농도의 단백질을 측정할 수 있고, 반응 색이 비교적 강하게 나온다는 것이다. 그러나 이는 시약들이 방해물의 영향을 받는 경우가 많아 단백질이 변이될 수 있다는 단점이 있다.

참고 자료

Ninfa, Alexander J. (2010). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology. Wiley. page. 117–118
2018년도 2학년 2학기 실험노트
MSDS
William L. Masterton Cecile N. Hurley Edward J.Neth, 화학교재연구회, 2014, 마스터톤의 일반화학, 사이플러스, page 347~361