Transformation

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 재조합된 DNA(eGFP)를 competent cell에 넣은 후, 용액을 Ampicillin이 포함되어 있는 LB 배지에 고르게 도말한다. 생성된 colony를 대조군과 비교하여 형질전환(transformation)에 대하여 고찰해보는 것이다.

2. Experiment
 시약 및 장치
- BL21(E.coli competent cell) : DNA를 삽입할 수 있도록 처리한 세포이다. 단백질 발현을 위해 사용한다.
- LB 배지 : 박테리아 성장에 주로 사용되며 영양소를 공급해주는 Yeast extract(효모추출물), 삼투압을 조절하여 세포가 터지지 않게 해주는 NaCl, 질소공급원으로 사용되는 Tryptone으로 구성되어있다.
- Recombinant DNA, Agarose(액체 배지를 고체로 굳혀주는 역할), 1.5ml microtube, Incubator(일정한 온도 유지), Micropipette, autoclave(고온, 고압의 증기 살균기)
- Ampicillin(1000X) : -lactam계 항생제로 세균의 세포벽 합성을 방해한다. 온도에 민감하기 때문에 60℃ 이하에서 사용해야 한다.

 실험 방법
① Table 1의 조성으로 LB고체를 만든 후 Autoclave로 멸균한다.
 Autoclave 사용 시 끓어 넘칠 수 있기 때문에 증류수를 반 정도 채워주고 사용하며 고온, 고압이므로 주의하여 사용한다. 멸균 후 온도와 압력이 충분히 떨어진 후에 뚜껑을 열어야 한다.
② 60℃이하가 되었을 때, Ampicillin(1000X)을 넣고 Petridish에 각각 20ml 씩 넣고 식힌다.(2개)
→ 이 단계까지는 조교님이 만들어 오셨다.
③ 재조합 된 DNA를 Table 2와 같은 비율로 1.5ml Microtube에 넣는다.
④ Pipette을 이용하여 섞은 후 10분 동안 얼음에서 반응시킨다.

참고 자료

“2019 생물화학공학이론 및 실험” 실험 노트
DYNE BIO “Transformation of recombinant DNA into cell”
google 이미지, 위키백과
Reece, Taylor, SIMON, Dickey, “생명과학 개념과 현상의 이해”, 2011, p186, 212
Mc Graw Hill, “미생물학” , 8판, 라이프 사이언스, p809
pET-22b(+) protocol
http://www.ibric.org
https://blog.naver.com/hafs_snu/221432886630 [생화학실험 IPTG 유도]
https://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes#BL21.28DE3.29