결과3_Restriction of DNA A+ 결과레포트

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract

이번 실험은 실험을 위해 사용할 Plasmid DNA를 제한효소를 이용하여 절단한 후 전기영동을 통해 절단된 DNA의 크기를 분석해보는 실험이었다. 제한 효소로는 XhoI, NdeI, EcoRI 3가지가 DNA를 절단하기 위해 사용되었다. 3가지 제한효소는 모두 Sticky end를 가진다.
이론적으로 볼 때 1가지 제한효소를 넣은 1,2,3조에서는 8kbp에 가까운 값이 나와야하며 2가지 제한 효소를 넣은 4조에서는 EcoR I & Xho I를 넣었으므로 1.7kbp, 6.3(5.5+0.8)kbp 5조는 Eco R I & Nde I를 넣었으므로 0.8kbp, 7.2(1.7+5.5)kbp 6조의 경우에는 Xho I & Nde I를 넣었으므로 5.5kbp, 2.5(0.8+1.7)kbp의 결과가 나와야한다. 마지막으로 3가지 제한 효소를 넣은 DNA는 0.8kbp 크기에 해당되는 eGFP, 1.7kbp 크기에 해당되는 another gene, 5.5kbp 크기에 해당되는 vector 이렇게 3개로 분리되어야한다. 하지만 잘 된 실험도 있었지만 이런 이론적 결과와는 다른 값을 보이는 실험도 있었는데 이에 대한 이유를 고찰해보았다.

2. Experiment

(1) 아래의 레시피대로 반응용액을 만들었다. 완성된 반응용액 부피가 아주 미량이기 때문에 벽에 맺힌 용액들이 있어 피펫팅과 함께 미니 원심분리기를 이용하여 잘 섞어 주었다. 또한 우리 조는 제한 효소를 Xho I 한 가지만 넣었기 때문에 전체 20μl을 맞춰 주기 위해 DDW를 9μl 넣었주었다.

주의 사항 : 이 때 시약은 아래의 표에 나와 있는 순서대로 차례로 넣었으며 아주 미량이기 때문에 피펫팅에 유의하여야 한다. 또한 이번 실험은 특히 제한 효소를 넣을 때 피펫을 최대한 계면에서 진행했다. 그 이유는 이번 실험에서는 tube에 제한 효소가 묻어있게 되면 큰 오차를 발생시킬 수도 있기 때문이다. 이것을 방지하기 위해 미니 원심분리기를 이용하여 오차를 줄여주었다.

참고 자료

전기영동 최신프로토콜, 편집부(저), 월드사이언스, 2006, p14~17
캠밸 생명과학 9판, 바이오사이언스, 편집부, p398~401
미생물 실험서, 보문각, 유민 외 2명, p54~56