Liquid culture 결과레포트 [A+]

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"Liquid culture 결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 eGFP를 포함한 세포를 liquid culture에서 배양하며 단백질의 발현을 확인하는 실험이다. 세포를 배양한 후 흡광도가 0.612 값을 가질 때 Isopropyl 를 넣어주었다. 이는 세포 생장 곡선(cell growth curve)의 대수 성장기로서, 세포가 가장 빠른 속도로 늘어나며 가장 균일한 연구결과를 얻을 수 있는 시기이다. IPTG는 이번 실험에서 억제제에 결합하여 그를 제거하고 lac-operon의 전사를 개시하는 유전자 발현 유도자(inducer) 역할을 한다. 이후 성장한 단백질을 확인한다.

2. Experiment
(1) 기구 및 시약

→ Flask의 마개로 silicon stopper를 사용한다. 이는 미생물이 배양되기 위해 필요한 조건인 산소가 제공될 수 있도록 한다. Flask의 마개를 여닫을 때는, 용액과 대면하는 마개의 아랫부분이 외부 미생물에 노출되지 않도록 유의한다.

시약)
- Isopropyl (1000X)
Isopropyl 은 젖당 대사물으로, lac-operon의 전사를 개시한다. 즉, 본 실험에서 유전자 발현 유도자(inducer)로서, lac-operon에서 통제된 유전자의 단백질 발현을 유도하는 것에 사용된다. 그 매커니즘으로는 IPTG가 억제 단백질에 결합함으로써 억제 단백질이 작동유전자에 결합하지 못하는 것이다. 이로써 lac-operon의 전사가 개시된다. IPTG는 0.1에서 1.0mM 정도의 농도에서 효과적인 inducer이다. 농도 범위는 plasmid의 종류나, 세포 유전형에 따라 다를 수 있다.

그림 1. IPTG의 구조

- Ampicillin (1000X)
ampicillin은 세포벽 합성을 억제하는 항생제이다. 온도에 민감하므로 60 ℃ 이하에서 실험을 진행한다.

- LB배지 (Yeast extract, NaCl, Tryptone)
영양분 등 미생물 생장에 필요한 요소를 포함한 배지이다.

참고 자료

김민주 외 5인, 일반생물학실험, 120-142, 동아대학교 출판부
Raina M. Maier 외 2명, 환경미생물학, 동화기술교역, 2004
김종협, 미생물학 실험서, 대광문화사, 1993