ITS Primer 를 이용한 PCR을 통한 미지의 진균 동정
- 최초 등록일
- 2021.01.18
- 최종 저작일
- 2019.09
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소개글
환경 내에 존재하는 진균을 배지에 배양하여 검경하여 형태학적으로 동정해보고 진균의 PCR에 이용되는 ITS 프라이머를 이용해 유전자 증폭 및 염기서열 분석을 실시하여 미지의 진균을 동정하는 실험 발표자료입니다.
본 발표 자료에는 진균의 배지 제작, 진균 유전자의 추출, 진균의 PCR에 특이적으로 사용되는 ITS 프라이머에 대한 원리, PCR 산물의 시퀀싱 및 결과 분석, Cladosporium속 진균의 특성 및 병원성에 대한 내용을 담고 있습니다.
목차
1. 배지 제작
2. 진균 채취 및 배양
3. 배양된 균 확인 및 계대배양
4. DNA 추출
5. PCR
6. 전기영동, Gel Purification
7. Sequencing 및 결과 분석
본문내용
1. 배지 제작
SDA 배지를 제작
-1L DW에 65g 파우더 첨가
세균에 의한 contamination 방지를 위해 penicillin-streptomycin을 첨가한 배지(PS+)와 무첨가 배지(PS-) 2종을 제작
2. 진균 채취 및 배양
-진균이 많이 배양될 것으로 예상되는 정수기 물받이에서 채취 시도
-멸균 면봉을 사용하여 채취, 각 배지에 도말
-실험실 실온에서 일주일간 배양
3. 배양된 균 확인 및 계대배양
-PS- 배지 유백색의 콜로니가 배양되었음.
-현미경 상에서 균사, 격벽, 포자 등 관찰X
-세균으로 생각됨
-계대배양 실시
3-2 계대배양된 균 관찰
- 계대배양 중 contamination이 발생한 것으로 예상
- 중심부 청록색, 주변부 백색, 솜털형 콜로니
- 현미경으로 관찰 시 격벽, 분생자병을 가진 자낭균류로 생각
- 이러한 특징을 바탕으로 Penicilium속의 균으로 추정함
4. DNA 추출
- 계대배양된 콜로니 일부를 배지 와 함께 잘라 DNA 추출 실시
- Tissue lysis buffer, Proteinase K 첨가 후 60℃ incubating
- 추출된 DNA의 농도는 16.5㎍/㎖로 PCR진행에 적합
참고 자료
없음