결과3 Restriction of DNA 5조

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 Plasmid의 Supercoiled 구조를 인식부위와 절단 부위가 동일한 Type 2 유형의 제한효소 Nde I, Xho I, EcoR I을 사용하여 최종적으로 3개의 선형 DNA를 만들고, 이를 결과적으로 전기영동을 통해 각 DNA의 길이를 파악하는 실험이다. 실험 과정에서 해당 제한 효소들의 부반응이 진행되지 않게, 활성화가 잘 일어나는 에서 1시간 동안 반응을 진행하였고, 본 조는 EcoR I, Nde I의 2 제한 효소를 사용하였다.
본 조의 전기영동 결과는 이론적으로는 2개의 선형 가닥이 나타나고, 각각 0.8kbp와 7.2kbp 크기를 보여야 되지만, 이론과 달리 6.0kbp ~ 8.0kbp 사이 크기의 하나의 선형 DNA만 관찰되었다. 이른 이론과 적합하지 못한 결과이고, 결과의 가장 큰 오차는 미량의 제한 효소를 주입하는 실험 과정에서 나온 10μl pipette 사용의 오차가 있다.
추가로 Star activity 부반응에 따라서 해당 반응이 일어나는 원인 중, 1)8.0보다 높은 pH효속 기질 DNA에 대한 과잉 반응, 2)반응에서 이 외에 2+ 양이온의 존재로 미뤄 볼 때, 본 조가 이전에 제작한 DNA에 문제가 있는 것으로 보인다.

⑷Electrophoresis apparatus (+ Electrophoresis agarose)
본 실험에서 Plasmide DAN를 각 Nde I, Xho I, EcoR I의 제한 효소로 선형으로 절단한 가득의 크기를 분석하기 위한 기구이다. Matrix로 Agaros Gel을 사용하여 양 끝에 전압차 100V를 걸어 주고, 홈에 Ladder 용액 및 DNA & Loadign Star를 넣어 주어 주입한 DNA가 +극으로 이동하여 서로 다른 이동거리에 따른 크기 분석을 비교해준다.

참고 자료

2020 생물화학공학 이론 및 실험노트
Willey, Sherwood, Woolverton, 미생물학 제9판, (주)라이프사이언스 p137~172, p358~371
유주현 외 1명, 응용미생물학실험, 도서출판효일, p211~250
오계헌 외 4명, 최신 미생물학 실험 제 2판, 신광문화사 p210~220