미생물 배양 / DNA 분리 정제 / primer design / PCR / DNA 전기영동

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목차

1. 미생물 배양
2. genomic DNA 분리 정제
3. Primer design
4. PCR
5. DNA 전기영동

본문내용

미생물배양

Introduction(실험소개)
E.coli DH5α를 이용해 고체 배지에 3분 도말하여 콜로니를 얻은 후, 액체 배지에 접종하여 배양하였다.

material method
실험 재료로는 E.coli DH5α, 에탄올, 알코올 램프, LB 배지, 백금이, 액체 배지, Petri Dish가 필요하다.
먼저 에탄올로 주변을 소독하고, Petri Dish의 뚜껑이 아닌 배지에 배지의 종류, 날짜, 실험자 이름, 균의 종류를 라벨링한다. 그런 다음 알코올 램프를 이용해 백금이를 멸균한다. 백금이를 멸균된 배지에 살짝 찍어서 식히고, 대장균을 3분 도말한다. 대장균을 1분 도말한 후 다시 멸균시키고 2분 도말, 또 다시 멸균시킨 후 3분 도말한다. 그런 후 인큐베이터에 16시간 이상 배양하면 콜로니를 확인할 수 있다. 인큐베이터에는 뚜껑이 아래로 오도록 뒤집어 넣는다. 콜로니를 확인한 후, 알코올 램프로 백금이를 멸균하고 액체 배지에 찍어서 백금이를 식힌 후 콜로니를 하나 가져와서 액체 배지에 접종한다. 마지막으로 200RPM으로 쉐이킹 하면서 배양해 주면 된다.

result
인큐베이터에서 배양 후 콜로니가 뜬 모습

쉐이킹 후 오른쪽의 액체배지가 탁도를 띠는 것을 볼 수 있음

disscusion
key words : 대장균, 콜로니
본 실험에서 백금이를 이용해 획선평판법인 3분 도말을 했다. 이는 일반적으로 고체 배지에 사용하며 싱글 콜로니를 얻는게 목적이다. 1 cell = 1 colony로, 단일 종 미생물을 얻기 위함이다. 인큐베이터에 넣을 땐 뚜껑이 아래로 오도록 뒤집어 넣는다. 뚜껑이 위로 오도록 넣는 경우, 낙하 세균 등으로 뚜껑에 미세한 오염이 생겼을 수 있으며 뚜껑에 수증기가 맺혀 물방울이 배지로 떨어져 오염될 가능성이 있으므로 이를 배제하기 위함이다. 액체 배지에 접종 과정에서 멸균되지 않은 손잡이 부분이 들어가 오염되거나, 피펫 팁이 들어가서 오염될 수 있다. 따라서 접종 과정에서 주의가 필요하다. 액체 배지에 접종 후 200RPM으로 쉐이킹 하면서 배양한다. 쉐이킹으로 산소와 많이 접촉할 수 있게 되며 이를 통해 호기성 생물이 잘 자라게될 수 있다.

참고 자료

없음