Protein determination & Proteasome activity assay

목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 실험 고찰
6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
- 이번 실험의 원리인 BCA method와 같은 이론들에 대해 이해한다.
- Protein determination & Proteasome activity assay 실험을 진행한다.

2. 실험 원리
- Proteasome activity assay
프로테아솜 활성 분석 키트(ab107921)는 AMC 태그가 부착된 펩타이드 기질(DMSO의 프로테아솜 기질(Succ-LVY-AMC)을 사용하여 키모트립신과 유사한 활성을 이용합니다.
이 기질은 자유롭고 형광성이 높은 AMC(Ex/Em 350/440nm)를 방출한다.진핵생물에서, 손상되거나 필요하지 않은 단백질은 일반적으로 유비퀴틴 프로테아솜 시스템에 의해 분해된다. 이 시스템에서, 단백질 기질은 종종 먼저 유비퀴틴 폴리펩타이드 체인과 공유적으로 변형된다. 이 사슬은 2.5 MDa, ATP 의존적 다중 서브 유닛 프로테아제 복합체인 26S 프로테아솜에 전달하기 위한 신호 역할을 한다. 프로테아좀은 배럴 모양의 20S 코어 입자(CP)로 구성되며, 19S 조절 입자(RP)에 의해 한쪽 또는 양쪽 끝에 캡이 씌워진다. RP는 기질을 인식하고, 기질을 펼치고, 파괴를 위해 CP로 이동시키는 역할을 한다. 여기서는 26S 단백질아좀과 19S RP 및 20S CP 서브컴플렉스를 효모 사카로미시스 뇌종양으로부터 분리하기 위한 간단한 1단계 정화 방법과 시험관 내 유비퀴틴 의존 및 유비퀴틴 독립 단백질 분해 활성을 측정하기 위한 검사에 대해 설명한다.

- Western blot
웨스턴 블랏은 단백질의 혼합물 중에서 특정 단백질 분자를 검출하기 위해 사용되는 실험실 방법이다. 이 혼합물은 특정 조직이나 세포 유형과 관련된 모든 단백질을 포함 할 수 있다. 서양 블롯은 관심 있는 단백질의 크기를 평가하고 단백질 표현의 양을 측정하는 데도 사용될 수 있다.

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