[분자유전] DNA sequncing 방법

*경*

최초 등록일: 2003.11.29
최종 저작일: 2003.11; 4페이지/ MS 워드; 가격 1,000원

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* DNA 염기서열 분석
1975년, Frederick Sanger와 그의 동료들, 그리고 Alan Maxam과 Walter Gilbert 등이 DNA의 정해진 조각의 정확한 염기서열을 결정하는 서로 다른 두 방법을 고안해 냈다. 이러한 눈부신 약진은 분자생물학에 대변혁을 일으켰다. 이들 DNA염기서열결정방법( DNA sequencing)은 유전자의 일차구조를 결정할 수 있게 하였으며, 궁극적으로, 인간게놈의 30억 염기쌍의 서열을 알 수 있게 되었다.

(1) Sanger 사슬종결 서열분석 방법
Sanger 방법의 첫 단계는 단사 형태로 클론된 DNA를 제공하는 M13 파아지 또는 파아지미드와 같은 벡터에 DNA를 클론하는 것이다. 지금은 이중사 DNA를 가지고도 간단히 열처리로 염기서열 판독을 위한 단사 DNA를 만들 수 있다. 단다 DNA에 약 20개 염기 길이의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 잡종화 시킨다. 이 프라이머는 벡터의 다수클로닝 부위 오른쪽 옆에 잡종화할 수 있도록 고안되어 그 3’말단은 다수클로닝 부위내에 있는 삽입체를 향하게 된다.
만약 DNA중합효소의 Klenow 절편을 이용하여 프라이머를 연장한다면 삽입체에 대해 상보적인 DNA를 만들 수 있을 것이다

참고 자료

박상대, 분자생물학, 라이프사이언스

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