생화학실험 Agarose gel 전기영동 및 단백질 추출 고찰

소개글

생화학실험 Agarose gel 전기영동 및 단백질 추출 실험 레포트 중 고찰부분입니다.

목차

1. 시약 및 기구

2. 실험 방법
1) Agarose gel electrophoresis

3. 고찰

본문내용

1-1. Agarose gel electrophoresis
① 50X TAE buffer를 희석해 1X TAE buffer 400 ml를 제조한다.
② 삼각플라스크에 agarose 0.75 g과 1X TAE buffer 50 ml를 넣는다.
③ Microwave를 이용해 agarose가 완전히 용해될 때까지 약 1분 30초간 가열한다.
④ 녹인 agarose가 50 ~60 °C 정도가 되면 EtBr(or Redsafe)를 1/1000(redsafe :1/20000) 농도로 넣어준다. (redsafe 2.5 μl)
⑤ agarose gel caster에 agarose 용액을 부어준 후 well comb를 끼워준다.
⑥ 완전히 굳을 때까지 실온에서 2~30분 방치한다.
⑦ Well comb를 제거하고 gel이 완전히 덮일 수 있도록 충분한 양의 TAE buffer를 가한다.
⑧ EP tube에 DNA 시료를 DNA loading buffer와 혼합한 후 피펫을 이용해 gel의 well에 loading시킨다.
⑨ 전극을 연결하고 전압을 가해 running 시킨다.
⑩ Loading dye를 통해 DNA 시료가 이동한 거리를 파악, 적당한 거리만큼 이동하였으면 전기영동을 중지한다.
⑪ 전기영동을 마친 gel을 UV를 이용해 DNA band를 관찰하고 gel 이미지를 촬영한다.

참고 자료

[네이버 지식백과] 아크릴아마이드 [acrylamide] (두산백과)
생화학실험매뉴얼
[네이버 지식백과] 황산 도데실 나트륨 [黃酸──, sodium dodecylsulfate] (화학용어사전, 2011. 1. 15., 화학용어사전편찬회, 윤창주)