[유전공학실험] A+레포트 / Plasmid 분리정제 및 제한효소 절단 (Plasmid prep and Restriction Enzyme digestion) 실험레포트

소개글

"[유전공학실험] A+레포트 / Plasmid 분리정제 및 제한효소 절단 (Plasmid prep and Restriction Enzyme digestion) 실험레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론
1) 플라스미드 DNA의 분리
2) 세포의 유전체 DNA 분리
3) 파지 DNA의 분리

3. 준비물
1) 실험 기기
2) 재료 및 시약

4. 실험 방법
1) colony pick-up
2) Plasmid preparation
3) Restriction Enzyme digestion & Gel Electrophoresis

5. 실험 결과
1) Nanodrop 결과
2) 전기영동 결과

6. 논의 및 고찰
1) 실험에서 사용한 제한효소 NdeⅠ의 특징은 무엇인가?
2) 전기영동으로 확인하기 위해 플라스미드를 절단할 때 BamHⅠ이나 XbaⅠ을 사용하지 않고 NdeⅠ을 사용한 이유는 무엇인가?

본문내용

1) 실험 목적
transformation된 콜로니를 용해시켜 플라스미드 DNA를 얻어낸다.

2) 실험 이론
- DNA의 분리
DNA를 분리하는 과정은 유전공학, 분자생물학 실험에서 거의 필수적으로 사용된다. DNA 분리를 위해서는 단백질이나 RNA 등의 불순물이 없어야하며, 분리 효율이 높아야 하고, 분리 중에 DNA의 구조나 성질을 변화시켜서는 안 된다. DNA가 분해되거나 단일가닥으로 변성되지 않도록 하기 위해 분리과정이 너무 복잡하거나 많은 시간이 걸리지 않아야한다.

1. 플라스미드 DNA의 분리
플라스미드 DNA를 분리해내기 위해서는 박테리아의 단백질이나 RNA와 함께 유전체 DNA도 제거해야한다. 플라스미드 DNA의 분리는 세 단계로 나누어진다. 먼저, 박테리아 세포로부터 플라스미드 DNA와 유전체 DNA를 포함하는 세포 용해액을 얻는다. 다음으로 플라스미드 DNA와 유전체 DNA의 구조적 차이를 이용하여 플라스미드 DNA만 분리하고, 마지막으로 분리된 플라스미드 DNA를농축시켜 순수한 플라스미드 DNA 용액을 만들어낸다.

① 알칼리 용해 방법
알칼리 용해(alkaline lysis) 방법은 용해, 단백질 제거 및 DNA 변성, 중화단계로 진행된다. 용해단계는 세포를 파괴하는 단계로 세포 현탁액이라 부르는 용액Ⅰ이 침전된 박테리아를 현탁시킨다. 다음으로 단백질을 제거하고 박테리아의 유전체 DNA를 변성시키기 위해 SDS와 NaOH가 함유된 세포 용해 용액인 용액Ⅱ를 사용한다. SDS는 세포막에 포함된 인지질과 단백질을 제거하여 세포막을 터뜨림으로써 세포 성분의 방출을 유도하고, NaOH는 플라스미드 DNA와 박테리아 DNA뿐만 아니라 단백질도 변성시킨다. 적절한 용해 시간은 박테리아 유전체 DNA의 방출을 최소화 하면서 가장 많은 양의 플라스미드 DNA를 방출시킬 수 있다. 박테리아 유전체 DNA가 플라스미드 DNA와 섞이는 것을 막기 위해 이 과정동안 용액을 강하게 흔들거나 교반시키지 않도록 유의해야한다.

참고 자료

없음