응용미생물학실험 예비보고서

소개글

부산대학교 응용미생물학 실험 예비 보고서입니다.

본문내용은 총 16개의 실험에 대한 예비보고서 내용을 포함하고 있습니다.

목차

Ⅰ. 미생물 동정실험
1. 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)
2. 전기영동
3. gel purification
4. BLAST
5. sequencing

Ⅱ. 세균 독소의 관찰 및 생리 실험
1. 순수분리
2. Burkholderia glumae
3. Burkholderia gladioli
4. motility test
5. TLC(Thin Layer Chromatography)

Ⅲ. 세균의 유용한 유전자 cloning 실험
1. TA cloning
2. 형질전환
3. Blue/White screening
4. 항생제

Ⅳ. 세균과 미생물의 상호작용 실험
1. 식물 방어 시스템
2. Nicotiana tabacum-식물 모델 담배

본문내용

<미생물 동정실험> 예비보고서

1. Title : 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)

2. principle

PCR을 통해서 DNA를 증폭시켜서 많은 DNA를 얻어서 전기영동에 로딩하여 눈으로 확인할 수 있다. PCR은 온도조절이 정밀한 PCR 기계에서 수행하는데, 이 기계는 여러 사이클을 자동으로 수행할 수 있도록 되어있다. PCR 단계는 다음과 같다.

pre-denaturation 94℃, 2분

denaturation 94℃, 5초 ┐
annealing 40℃, 30초 │ cycle
elolgation 72℃, 30초 ┘

storage 4℃

① pre-denaturation : 94℃에서 2분, denaturation 전 데워주는 전 단계이다.

② 1 단계 - denaturation : 94℃에서 5초, denaturation 단계로 ds DNA의 가닥을 분리한다. ds DNA를 94℃ 정도의 높은 온도로 처리하여 이중나선구조를 지탱하던 수소결합을 파괴하여 ss DNA로 분리한다.

③ 2 단계 - annealing : 40℃에서 30초, 프라이머를 부착한다. 프라이머 결합과정은 온도를 내린다. 분리된 두 가닥의 ss DNA를 40℃의 온도를 유지하여 각 ss DNA 3‘ 말단부분의 염기배열 순서와 상보적인 염기를 가진 짧은 길이의 DNA 단편인 프라이머가 붙게된다. 이 때 프라이머는 poliovirue DNA에 상보적이어야 한다. 이 프라이머가 붙어야 중합반응을 시작 할 수 있다.

④ 3 단계 - elolgation : 72℃에서 30초, 단계 DNA를 합성한다. 프라이머로부터 넣어준 dNTP를 재료로 하여 ss DNA를 주형으로 삼아 새로운 가닥의 합성이 일어난다. 이 때 분리된 두 가닥의 ss DNA가 다시 이중나선의 구조로 결합하는 것을 막기 위해 72℃의 고온에서 DNA 중합반응을 수행해야 한다. 고온균이 가지고 있는 내열성 효소는 일반적인 박테리아나 다른 동식물의 중합효소와는 달리 높은 온도에서도 활성을 잃지 않고 DNA 중합반응을 수행한다.

참고 자료

PCR 실험 노트/ Taketoshi/ 월드사이언스 /P. 59~60
미생물 유전학/ 주우동 외 7인/ 월드사이언스/ P. 83~85
유전공학의 이해/ 남상욱 외 2인/ 라이프 사이언스/ p.126,127
신편 미생물실험법/ 서영숙, 이용수/ 보문각/ p.60~65
출수기 기상환경이 세균성 벼알마름병 발생에 미치는 영향 식물병연구/ 차광홍 외/ p.150~154
https://en.wikipedia.org/wiki/Burkholderia_glumae
미생물학 실험/ 이혜주/ 동아대학교 출판부/ p.200~201
길잡이 유기화학/ 신성철/ 자유아카데미/ p.337~341
분석화학실험/ 신익수, 강위경/ 자유아카데미/ p. 44
쉬운 식품분석/ 이근보, 양종범, 고명수/ 유한문화사/ p.331