(동국대 의생명공학과) Western blot 및 ELISA 레포트
- 최초 등록일
- 2022.07.12
- 최종 저작일
- 2020.09
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소개글
"Western blot 및 ELISA 레포트"에 대한 내용입니다.
목차
1. 실험목적
2. 실험방법 및 과정
3. Western blot 실험 원리
4. BCA assay 실험 원리
5. 결과
6. 고찰
본문내용
1. 실험목적
면역반응 유도를 위해서 면역세포(Raw cell)에 시간대별(control, 10, 20, 30, 60, 90 min)로LPS를 처리함으로써 세포 내 signaling protein(lysate를 이용하여 특히, p-ERK)을 알아보기 위한 실험을 진행한다.
2. 실험방법 및 과정
(1) 6 well plate에 1X10^6 cells/mL(Raw264.7cells : mouse macrophage)를 미리 깔아놓고, 각 cell에 LPS를 1ug/mL씩 처리한다. 처리 시, 각 well당 90 min, 60 min, 30 min, 20 min, 10 min, NT(Non-treat)의 시간을 가지고 LPS를 같은 농도로 처리한다.
(1) -1> 각 Well당 2 mL media에 40u씩 LPS를 Adding한다.
(1) -2> 각 처리 시간에 맞게 Incubator : 90 min, 60 min, 30 min, 20 min, 10 min, NT
(2) (for signal stop) Media를 버리고, 차가운 PBS를 세포 위에 부어준다.
(3) Washing 후, 바로 lysis buffer를 100 ul/well씩 adding하여 세포에서 lysate를 얻는다.
(4) 끈적이는 lysate를 EP tube에 넣어서 보관한다. (labeling도 함께 진행)
(5) Sonication을 5층 실험실에서 뽀얗게 용액이 될 때까지 진행한다.
(6) 거품을 없애기 위해서, Sonication 후, Centrifuge도 진행한다. : 13,000 rpm / 15 min
(7) Incubator에 30 min 동안 보관하여 반응을 진행시킨다.
(8) BCA assay(duplicate) 진행(562 nm)하여, 단백질의 양과 농도를 계산한다.
참고 자료
없음