[생물공정실험] 6주차 P1 Transduction 결과보고서

노루궁뎅이

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최초 등록일: 2023.01.15
최종 저작일: 2022.12; 4페이지/ 어도비 PDF; 가격 3,000원

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이번 실험에서는 P1 phage를 이용하여 recipient cell에 transduction하고 target 유전자가 삽입됐는지 colony 색으로 확인해보았다. E.Coli균의 사전 준비 과정은 조교님께서 대신 해주 셨다. 이번 실험에서 recipient cell은 gadA gene이 knockout된 E.coliΔgadA이고, donor cell은 copA gene이 knockout되고 kanamycin 항생제에 대한 저항성을 가진 유전자가 삽 입된 E.coliΔcopA::kan이다. 이를 통해 항생제에 대한 저항성을 가진 유전자가 제대로 삽입 됐는지 확인하는 test를 진행했다. 먼저 P1 salts를 resuspense한 후 P1 lysate를 혼합한 용 액을 배양했다. 이때 P1 salt에 칼슘이온이 포함된 이유는 E.coli의 세포막과 DNA가 음전하를 띠어 반발력이 생기므로 칼슘이온을 첨가해줌으로써 세포막 음전하를 중화시키고 일시적으 로 막투과성을 변화시키는 방식으로 comepetent cell을 만들어주기 위함이다.

참고 자료

Title: 혈액 및 박테리아의 분리
E.coli 세포막을 통한 박테리아 Phage DNA의 형질 전환 반응: 칼슘이온의 필요성 및 열충격처리의 역할에 대하여, 한국생화학지 v.17 no.2, 1984년, 박재봉.임동빈.이현재

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