단백질 분리 및 전기영동

소개글

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목차

1. 실험배경
1.1 Lysis buffer
1.2 Bradford assay
1.3 PAGE

2. 실험목적

3. 실험재료 및 방법
3.1 실험재료
3.2 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰

본문내용

1.1 Lysis buffer (용해 완충액)
단백질은 세포막과 세포 안에 존재하기 때문에 세포를 붕괴시켜야 단백질을 얻을 수 있다.
세포를 붕괴시키기 위한 물리적 방법으로는 세포를 갈아서 세포막을 붕괴시킬 수 있고, 화학적인 방법으로는 세제로 세포막을 붕괴시킬 수 있는데, 이때 이용되는 세제에서도 이온성 세제인 SDS와 비이온성 세제인 NP-40, Triton가 있다.
Lysis buffer는 세포 화합물을 분석을 위해 개방형 세포를 파괴할 때 사용되는 완충액이다. 대부분의 용해 완충액은 용해물의 산도 및 삼투압을 조절하기 위해 염(NaCl)을 함유한다. 때로는 세제(Triton X-100 또는 SDS)를 첨가하여 막 구조를 해체할 수도 있다. 또한 용해 완충액은 동물과 식물의 조직 세포 모두에서 사용할 수 있다.

1.2 Bradford assay
단백질 정량(시료 내에 포함된 단백질 양, 농도를 구하는 과정)법 중 하나로 UV-Visible Spectrophotometer를 이용해 흡광도를 측정하고 standard 물질인 BSA를 기준으로 시료에 단백질이 얼마나 들어있는지 측정할 수 있는 방법이다.
산성조건에서는 붉은색이었던 염색약이 푸른색으로 변하게 되고 단백질과 결합을 하게된다. coomassie blue가 단백질과 complex를 형성하는 과정에서 coomassie blue가 단백질의 중성을 무너뜨리면서 소수성 부위를 노출시키고, 노출된 단백질의 소수성 부위와 dye가 결합한다. 결합이 강해지면서 coomassie blue dye의 파란색 형태를 안정화 시키게 된다.
protein-coomassie blue complex수는 단백질의 농도와 비례하며 흡광도와도 비례하게 된다.
standard curve의 경우 R의 제곱 값이 1에 가까울수록 정확도가 높아져 실험이 잘 진행된 것인지 확인할 수 있다.

참고 자료

없음