화공생물공학 단위조작실험1 단백질 정량법 비교

목차

1. 실험제목
2. 실험날짜
3. 실험목적
4. 실험이론
5. 실험기구 및 시약
6. 실험방법
7. 실험결과
8. 고찰
9. 참고문헌

본문내용

1.실험제목: 단백질 정량법 비교

2.실험날짜: 2021/05/10

3.실험목적
Bicinchoninic Acid(BCA)와 Bradford를 이용한 단백질 정량법을 이용하여 미지 시료의 단백질 농도를 측정하고 두 방법의 결과를 비교 분석한다. 또한 미지시료를 분석함에 있어 어떤 방식이 적절한지 판단한다.

4.실험 이론
BCA Assay
1) 원리
단백질이 구리 이온(Cu2+)을 1가 양이온(Cu1+)으로 환원(reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 환원된 구리 이온은 Bicinchoninic Acid(BCA) 분자 2개와 반응하여 보랏빛의 착물을 형성하게 된다. 이 화합물은 파장이 562 nm인 빛 흡수율이 반응 전 BCA나 구리 이온이 담긴 용액에 비해서 높기 때문에 spectrophotometer를 사용해서 흡광도 차이를 측정할 수 있다. 보랏빛 착물이 더 많이 생성이 되면서 흡광도 값이 커지기 때문에 흡광도 값과 단백질 양은 비례한다.

2) 장점
- 일반적인 버퍼물질에 간섭을 덜 받는다.
- 높은 온도에서 한다면 아주 민감하고 빠른 반응을 할 수 있다.
- 계면활성제와 같이 사용할 수 있다.
- 반응 시약이 안정적이다.
- 서로 다른 단백질간의 반응 차이가 거의 없다.

3) 단점
- 실온에서 반응이 완전히 수행되지 않는다. (다량의 단백질을 정량할 때 문제)
- 농축된 단백질 샘플은 희석이 종종 필요하다.
- 단백질의 성질이 바뀐다.

Bradford Assay
1) 원리
염색약인 Coomassie brilliant blue dye 가 단백질과 결합하면 최대 흡광 파장이 465nm에서 595nm 로 바뀌게 되는 성질을 이용하여 595nm 에서의 흡광량이 단백질의 농도를 나타내게 되는 방법이다.

참고 자료

Walker J.M. (2009) The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation. In: Walker J.M. (eds) The Protein Protocols Handbook. Springer Protocols Handbooks. Humana Press, Totowa