세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 07. 파라핀 블록 및 절편 만들기

소개글

세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 07. 파라핀 블록 및 절편 만들기 관련 레포트입니다.

목차

１.   서론
 
２.   실험 목적
 
３.   실험 방법
가.    실험 재료(도구)
1)      샘플
2)      시약
3)      장비
나.    실험 방법
 
４.   실험 결과
 
５.   논의 (고찰)
 
６.   참고문헌

본문내용

파라핀 블록은 조직을 탈수시킨 후 조직에 파라핀을 채운 것으로, 보관을 한 후 파라핀을 제거하면 원래의 조직과 비슷한 상태로 되돌릴 수 있는 장점이 있는 방법이다. 파라핀 블록의 생성은 크게 ‘고정  탈수  투명화 침투  포매’ 과정으로 구성된다.

고정은 살아있는 세포와 화학성분을 자가 융해와 부패로부터 방지하기 위해 화학적, 물리적인 방법에 의하여 생체물질을 응고시키고, 불용성으로 변화시키는 과정으로, 이를 통해 성분을 보존하고 검사하기 쉬운 상태로 만드는 과정이다. 고정의 종류로는 크게 화학적 고정법과 물리적 고정법이 있고, 화학적 고정법에는 알데하이드를 이용한 교차결합 고정, 알코올을 이용한 침전 고정, 오스뮴을 이용한 산화반응 고정 등이 존재한다. 첫번째로, 교차결합 고정은 조직에 있는 분자 간의 공유결합을 유도하여, 고정을 하는 방식으로 가장 보편적으로 사용되는 방식이다. 교차결합 고정의 유도제로 포름알데히드(formaldehyde) 가 자주 사용되는데, 포름알데히드는 주로 단백질에 존재하는 아미노산 lysine 잔기 사이의 교차결합을 형성하여 조직을 고정시키는데, 이 교차결합은 단백질 구조에 영향을 거의 미치지 않기 때문에, 항원성을 일어버리지 않게 되고, 면역염색법에 주로 사용되는 방법이다. 글루타알데히드(glutaraldehyde) 포름알데히드와 작동기전이 유사하지만, 분자의 크기가 더 크기 때문에 더 강한 교차결합을 유도하여 더 강한 고정을 형성한다. 다만, 조직 투과도가 상대적으로 낮기 때문에 두꺼운 조직의 안 쪽부분까지 잘 고정하지 못하고, 너무 많은 교차결합을 형성하여 항체가 단백질에 접근하기 힘들게 하기에 면역염색법보다는 전자현미경 관찰에 주로 사용된다. 두번째로, 침전 고정은 탈수를 통해 수용성 단백질을 침전시켜 조직을 고정하는 방법이로, 에탄올, 메탄올 등의 알콜을 침전 고정 유도 물질로 이용한다. 주로 조직의 동결절편, 도말된 세포를 고정할 때 많이 사용된다. 마지막으로 산화제를 사용한 교차결합 고정은, 조직에 산화제를 처리하여 단백질 등의 분자 간 교차결합을 유도하여 조직을 고정하는 방법으로, 알데하이드 고정에 비해 세포의 구조가 더 잘 보존되는 장점을 지니지만, 분자가 더 심하게 변성된다는 단점을 지니고 있다.

참고 자료

김기정. "다양한 포르말린 고정액에 따른 병리 조직의 특수염색 및 면역조직화학염색 양상 비교." 국내석사학위논문 을지대학교 대학원, 2023. 대전
조해준. "알코올 기반 조직 고정제의 H&E 및 IHC 염색에 대한 효과." 국내석사학위논문 고려대학교 대학원, 2024. 서울
조지민. "포르말린에 고정된 파라핀 포매 간조직에서 C형 간염 RNA 바이러스 검출을 통한 법의학적 사인규명의 진단적 활용에 관한 연구." 국내석사학위논문 경북대학교 수사과학대학원, 2016. 대구
이창경. "조직 고정제 포르말린의 대체품에 대한 유효성 평가." 국내석사학위논문 건국대학교, 2017. 서울