서강대학교 현대생물학실험2_1차 풀레포트_PCR과 Agarose gel electrophoresis and gel purification

소개글

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목차

1. Abstracts
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

Abstracts
이번 실험의 목표는 세포 배양을 위한 배지를 제조한 다음, 형질 전환에 필요한 수용성 세포를 제조하기 위해 DH5α를 배양하고, PCR과 전기 영동을 실시하여 DNA 증폭과 전기 영동 원리에 대해 이해한다. 배지는 세포 배양을 위한 필요물질이 들어있는 것으로 LB broth와 LB agar plate를 이용한다. 수용성 세포를 형질전환 하고 선택배지로 제조된 LB agar plate를 이용해 생성된 colony로 형질전환 효율을 계산한다. PCR은 총 3단계로 고온으로 DNA를 변성하고, annealing temperature에서 primer를 결합한 뒤, Taq DNA polymerase로 DNA를 합성해 Target gene을 증폭한다. 전기 영동은 DNA의 크기와 전하량에 따른 분류를 가능하게 한다. 배양한 DH5α에 CaCl2와 냉각 그리고 heat-shock를 주어 competent cell로 전환하고, Ampicillin에 저항을 띄는 gene을 갖도록 transformation하였다. LB agar plate에 배양해 다음날 생성된 colony의 개수를 이용해 형질전환효율을 계산하였으며, 본 실험 colony의 개수는 0이며 조교 실험 결과로 계산한 형질전환효율(CFU/ug) 은 3.8*10^6 CFU/μg의 값을 얻었다. PCR로 증폭한 mixture를 전기 영동 하였으며, purification 이후 전기 영동 한 DNA는 다른 성분들이 제거되어 PCR mixture 전기영동 band보다 얇은 band를 얻는다. purification을 거친 DNA band의 크기는 약 750bp임을 알 수 있다. Ampicillin에 저항성이 없는 cell들이 성장하여 transformation 된 cell의 colony를 계산하기에 어려움이 생기기 때문에 ampicillin이 포함된 plate에 하루 이상 배양하면 안 된다. competent cell은 세포가 매우 약해져 있기 때문에 취급에 주의해야 하고, 형질전환효율을 증가

참고 자료

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