A+ 생화학실험 <14주차. 단백질 분석 (SDS-PAGE)> 레포트

소개글

안녕하십니까.

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목차

1. Title
2. Purpose
3. Theory
4. Chemicals & Apparatus
5. Procedure
6. Data & Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Title
14주차. 단백질 분석 (SDS-PAGE)
2. Purpose
지난 실험에서 정제한 단백질을 SDS-PAGE로 분석한다.
3. Theory
3.1 SDS-PAGE Electrophoresis 및 원리
SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)를 이용해 단백질에 음전하를 부여함으로써 Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE)를 수행하여 단백질을 크기에 따라 분리하는 전기영동방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 5~250 kDa 범위의 단백질을 분리하는 데 사용되며, 이 방법을 통해 단백질의 구조와 전하가 이동 속도에 미치는 영향을 제거할 수 있다. SDS에 의해 음전하를 띤 선형화 된 단백질은 전기장을 가했을 때 양극(+)을 향해 이동하며, 분자 크기에 따라 서로 다른 속도로 분리되는 것을 이용한다. 따라서 SDS-PAGE는 단백질의 크기 분석과 정량에 매우 유용한 방법이며, 이를 통해 다양한 단백질 샘플을 비교하고 분석할 수 있다.
Figure 1. Protein Loading, Electrophoresis, and Staining Process in SDS-PAGE.
SDS-PAGE의 원리는 다음과 같다. 먼저, SDS는 음이온성 계면활성제로, 단백질과 1.4:1(g)의 비율로 결합하여 단백질에 음전하를 부여한다. 이로 인해 단백질은 질량에 비례하여 음전하를 띠게 된다. SDS는 단백질의 3차원 구조를 파괴하고 선형화 시키며, 이로 인해 단백질의 본래 전하와 구조는 전기영동 과정에서 무시될 수 있다. 또한 단백질 샘플에 β-mercaptoethanol이나 DTT 같은 환원제를 첨가하여 이황화 결합을 환원시켜 구조를 더욱 선형화 할 수 있다. 그 다음 단계로, 이음전하를 띤 단백질들은 전기장을 걸어준 polyacrylamide gel을 통해 이동하게 된다.

참고 자료

Jeremy MB, Biochemistry 8th ed, Freeman, 2015, pp. 68~79.
Porath J, Carlsson J, Olsson I, et al, Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation, Nature, 1975, 258(5536), pp. 598~599.
Smith BJ, SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins. In: Walker, J.M. (eds) Proteins, Methods in Molecular Biology™, 1984, 1, pp. 41~55.