[이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] Western Blotting

소개글

이화여자대학교 생명과학실험1 과목 A+ 레포트입니다.
정성 들여 작성했습니다. 참고하시어 좋은 결과 있으시길 바랍니다.

(수업에서의 지정된 양식에 의해, result는 discussion 항목 가장 아래에 존재합니다.)

목차

I. 실험 목표

II. Introduction
1. Western Blotting
2. SDS-PAGE
3. Antibody

III. Methods
1. 실험 도구 (Materials)
2. 실험 방법 (Methods)
① SDS-PAGE
② Gel Cassette 조립 및 Membrane Transfer
③ Antibody Incubation
④ Detection

IV. Discussion
1. Stacking gel과 resolving gel의 차이
2. Running buffer와 transfer buffer의 조성 차이 및 그 역할
3. TTBS에 Tween-20을 넣는 이유
4. Direct detection과 indirect detection
5. Analysis of Results
① Transfer (with Ponceau S staining)
② Detection

V. References

본문내용

I. 실험 목표
Western Blotting을 이용하여 tubulin을 직접 detection 한다. 해당 실험을 통해 western blotting의 과정과 원리를 이해하는 것을 목표로 한다.

II.Introduction

1. Western Blotting
Western blotting은 sample 내 특정 단백질의 존재 여부나 크기, 양 등을 확인하는 실험법으로, 해당 단백질과 결합하는 antibody를 이용하여 단백질을 찾아내는 방식을 이용한다. Western Blotting을 진행하기 전, SDS-PAGE를 진행하여 단백질을 크기(분자량)에 따라 분리하는 과정이 선행되어야 한다. 이후 분리된 단백질을 membrane에 transfer 한다. Antibody를 이용하여 membrane 표면에 존재하는 해당 단백질을 잡아내는데, 이때 이 antibody에는 enzyme이 붙어 있다. 해당 enzyme과 발색 반응을 일으키는 substrate를 이용하여 단백질의 존재 여부를 눈으로 확인할 수 있도록 한다.
Western blotting에서는 1차 antibody와 2차 antibody를 사용한다. 1차 antibody는 detection 하고자 하는 단백질과 specific한 결합을 할 수 있다. 2차 antibody는 1차 antibody와 결합할 수 있는데, 이때 단백질의 detection이 가능하도록 enzyme이 conjugate 된 2차 antibody를 사용한다.

참고 자료

검색어 「ponceau S」, 『Thermo Fisher Scientific』,
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/kr/ko/A40000278, 접속일 2024.04.23.
검색어 「transfer buffer」, 『BIO-RAD』, https://www.bio-rad.com/ko-kr/feature/westernblot-transfer-buffer.html, 접속일 2024.04.23.
John M. Walker. Western blotting: methods and protocols. Humana Press. 2015,
Electronic ISSN: 1940-6029.
검색어 「tween-20」, 『Takara』,
https://takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=T9141, 접속일 2024.04.23.
검색어 「direct detection and indirect detection」, 『Jackson ImmunoResearch』,
https://www.jacksonimmuno.com/secondary-antibody-resource/immunotechniques/directandindirectwesternblotting/, 접속일 2024.04.23.
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