Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석

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실습 일시: 2021. 11. 10. – 11. 24.

Title : Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석

1. Introduction
1) 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들
(1) Single gene analysis : 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법
- Northern Blotting : 전기영동법에 의해 크기에 따라 분리된 RNA를 얇은 막 (니트로셀룰로스 또는 나일론 필터)에 옮긴 뒤, 원하는 서열에 상보적인 Probe를 만들어 특정 서열의 존재를 확인하고 양을 판별한다. 결과 분석 시 나타나는 밴드의 존재는 특정 서열이 존재하는지를 알려주고, 나타나는 밴드의 두께를 통해서는 RNA의 양을 추정할 수 있다. Northern Blotting은 살아있는 조직에서 언제, 어떤 조건에서 특정 유전자가 발현되는지 아는 데에 유용하게 사용될 수 있다.

- Real-time PCR

(2) Whole genome analysis : 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법
- RNA sequencing : 일반적으로, RNA 서열분석을 하려고 하는 sample의 전체 RNA 분자들을 추출하여 해독한다. RNA 분자를 cDNA로 역전사한 뒤 양쪽 끝에 sequencing adaptor를 붙인다. 이렇게 제작한 것을 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction)을 통해 증폭시키고 이것들의 염기서열을 분석한다.

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