산성탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 결과보고서

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목차

1. 실험목적
2. 원리 및 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험방법
5. 유의사항
6. 실험결과
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1.
실험 목적
이 실험은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 효소(산성 탈인산가수분해효소)를 추출하고, 이를 정제하여 이후에 진행할 효소 활성도를 측정하는 실험의 준비과정으로 효소의 기능, 분리, 정제 과정을 학습하고 이해할 수 있다.
2.
실험원리 및 이론
효소의 기능
산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며, 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 한다. 이 효소는 특정 기질(예: p-니트로페닐 인산염, PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매한다. 이 실험의 기질인 PNPP는 가수분해되면 노란색 화합물인 p-니트로페놀을 생성하며, 이 변화를 통해 효소의 활성을 측정할 수 있다.
산성 탈인산가수분해효소는 pH 5.0 이하의 산성 조건에서 가장 잘 작용한다.

효소의 추출 및 분리 기술
원심분리와 여과: 이 과정을 통해 세포 또는 조직에서 추출한 효소 혼합물을 여과하거나 원심분리하여 효소를 포함한 상층액과 불필요한 세포 잔해를 분리한다. 이는 효소를 분리하는 첫 단계이며, 이후의 정제 과정을 위한 기초 작업이라 할 수 있다.
3. 기구 및 시약
맥아, 무명망사, 1.0M MgCl2, (NH4)2SO4 포화용액, 원심분리기, 마이크로피펫, ice bath
4. 실험 방법
산성 탈인산가수분해효소의 분리
①맥아 25g을 4︒C의 증류수 10ml에 현탁하여 가끔 저어주며 30분동안 방치한 후 무명망사 두 겹으로 꼭 짠다.
②거른 액을 4︒C에서 100,000 x g 로 5분간 원심분리한다.
③상층액을 조심스럽게 눈금 실린더에 따라서 부피를 기록한다(분획 Ⅰ).
④1.0ml를 취하여 나중에 단백질과 효소활동도를 측정하기 위해 냉동 보관한다.

참고 자료

Cooper, T. G., 1977, The tools of Biochemistry, Wiley, New York.
Joyce, B. K., Grisolia, S., 1960, “Puri,ication and Properties of a Nonspecific Acid Phosphate from Wheat Germ”, J. Biol. Chem., 235. 2278
Stenesh, J., 1984, Experimental Biochemistry, Allyn and Bacon, Inc., Boston
염화마그네슘, 황산암모늄 MSDS, https://msds.kosha.or.kr/MSDSInfo/kcic/msdsdetail.do, 2024.9.17
David L. Nelson/Michael M. Cox/ 대표역자 윤경식, 2023, 레닌저 생화학, 월드사이언스,p 83-89/p 178
마이크로 피펫 사용방법 및 사진, https://blog.naver.com/passion0801/221816520169
원심분리기 사용방법, https://blog.naver.com/modulo42/223175301897