Lowry method와 Bradford Assay(단백질 정량)

소개글

연세대 생화학 실험(1) 보고서
A+ 보고서에요~ ^^* 고찰 정말자세해요
그럼 참고해서 잘 쓰세영!

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
......

본문내용

9.고찰
우리가 이번주에 한 실험은 Lowry method와 Bradford assay로 단백질의 농도를 측정해 보는것이었다. 실험의 핵심은 reagent만들기와 흡광도를 재는 것이었다. reagent를 만들때는 BSA(알부민단백질)과 DW, 그리고 만든 reagent를 혼합하여 흡광도를 재는 것이었다. Lowry method는 voltexing후 1시간을 기다려야 했으므로 우리는 실험시간을 줄이기 위해서 그 사이에 비는 시간에 Bradford assay의 실험을 하기로 했다. 우리조는 분담을 잘해서 Bradford assay을 가장 빨리 만들어서 제일 먼저 흡광도를 재었다. 그러나 3층에 있는 흡광도 측정기계가 너무 부정확해서 기다리는 동안 다시 Bradford solution을 빨리 만들어서 우리실험실에 있는 기계로 다시 측정했다. 결과는 역시 아주 정확하게 나왔다. 사실 이 실험은 빨리하면 부정확하게 나올 가능성이 큰데 그 이유는 정확한 파이펫 사용이 가장 중요하기 때문이다. 파이펫의 정확한 사용은 BSA의 curve가 정확해지는 직접적인 원인이 될 것이다. 어쨌든 우리조는 “신속, 정확”하게 다시 실험해서 매우 효율적인 시간활용을 했다고 본다. Lowry method실험에서 흡광도를 잴때에는 그 Lowry의 reagent를 다시 만들수는 있지만 1시간이나 지난후에야 쓸 수 있으므로 신중에 신중을 더 기해야 했다.
Lowry, Bradford에서 모두 흡광도를 잴때에 가장 중요한 것은 cuvette을 잘 washing하는 것이었다. 우리는 첫 번째로 메탄올로 wash하고 그 후 DW로 총 2번 washing을 했는데 이 2번의 wasing을 통해서 전에 담았던 미량의 reagent나 단백질의 성분을 깨끗하게 제거하기 위해서였다.

참고 자료

1) http://visio2000.com.ne.kr/VirtualText/proteins.htm
2)『생화학 실험』 최병법, 방병호, 방선권 공저 (문운당)
(실험전반내용)
3)『최신생화학』 김을상, 이남철, 이재철, 전병영, 정동효, 정영철, 정재현 (신광문화사)
(단백질정량부분)
4)生化學 ( 淸文閣 Frank B. Armstrong 강신원. 1992, )
5)우리교재-생화학 실험(1) 교본 6장내용
6)http://web.indstate.edu/thcme/mwking/protein.html#nterm
7)http://yasuar.hihome.com/wordhtm/proteinassay.htm
8)http://www.elpisbio.com/html-sub/protocols/protein%20assay.htm