[생명공학] Plasmid DNA preparation(예비 및 결과)

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목차

실험목표
실험원리 및 이론
-Plasmid 란
-Plasmid 의 종류
-Plasmid 의 이용
-Plasmid DNA의 정제
-Plasmid DNA의 분리
-solution Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ 용액
실험방법
실험결과
고찰 및 토의
참고문헌

본문내용

- 정제과정
플라스미드의 정제는 total cell DNA의 일반적인 분리방법과 같다. 플라스미드를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면된다. extract는 단백질을 제거하고 에탄올침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 totall cell DNA 분리와 plasmid 정제와는 중요한 차이점이 있다. 플라스미드 분리는 일반적으로 많은 양의 chromosomal DNA 로부터 분리하여야 한다. 플라스미드 분리방법은 플라스미드 DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리된다. 가장 큰 플라스미드의 길이는 E. coli 의 염색체 길이에 8%밖에 되지 않으며 대부분이 작다.
플라스미드와 bacteria DNA의 구조에 차이로부터 분리하는 방법이 있다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract 시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.
- plasmid DNA 정제방법
1) 대규모 정제(large scale preparation)
Ethidium bromide염료와 cesium chloride를 이용한 원심분리
·초원심침전 평형법
저분자용액으로 장시간 초원심하면 저분자의 밀도구배(액면에서 밑을 향하
여 농도 증가)를 갖는다. 여기에 고분자 용액을 첨가하면 침강계수에 따라(부력과 고분자에 대한 중력) 균형 잡힌 위치에 존재하게 된다.
고순도 DNA를 대량 정제 가능

2) 소규모 정제(small scale preparation)
제한효소를 이용한 DNA 절단, 접합, 형질전환, 염기서열 결정과 같은 용도를 위한 plasmid DNA는 적은 양의 배양액으로 부터 정제하는 저순도의 DNA만으로 충분하다.

참고 자료

없음