[생명공학] Transformation of competent E. coli(예비 및 결과)

소개글

A+ 받았던 보고서입니다.(예비결과모두)

목차

실험목표
실험원리 및 이론
-Transformation 이란?
-Transfomation된 개체의 판별
-Competent cell
-Competent cell 을 이용한 Transformation 의 과정
-Vector
-Plasmid Vector
-transformation의 방법
실험방법
실험결과(CELL사진첨부)
고찰 및 토의
참고문헌

본문내용

Transformation이라는 현상은 플라스미드 vector를 E.coli cell에 도입하고 발현할 수 있게 한다. 그러나 DNA clonning에서 유용하게 쓰이기 위해서 플라스미드는 특정 항생제에 대한 내성을 포함하고 있어야 한다. 예를 들어 ampicillin-resistance gene은 β-lactamase를 encode하는데, 이 효소는 암피실린을 inactivate한다. 플라스미드가 첨가된 후, 플라스미드를 취한 cell들은 암피실린을 포함한 배지에서 배양함으로써 쉽게 판별을 해낼 수가 있다.
보통의 E.coli cell들은 배지에서 직접 플라스미드 DNA를 취할 수 없다. 그렇지만 cell들을 특정한 divalent cation의 높은 농도에 노출시키면, 일부 cell들은 이해되지 않은 메커니즘에 의해 외부 DNA를 받아들일 수 있게 된다. 전형적인 경우에 E.coli cell들은 CaCl2로 처리되고 플라스미드 vector와 섞인다. 보통 10000개의 cell들 중에 하나의 cell만이 외부 DNA를 받아 들일 수 있는 competent한 상태가 된다. 각각의 competent cell들은 하나의 플라스미드 DNA 분자를 받아들인다. 처리된 cell들이 영양 배지에 plating되어 배양되면, 오직 매우 적은 plasmid를 받아들인 세균만이 생존하게 된다. 살아남은 colony의 모든 세균들은 하나의 E.coli cell 로부터 유래한 것이 된다.

참고 자료

없음