[세포생물학] Southern hybridization

소개글

세포생물학 실험레포트입니다.

목차

I. Introduction
II. Materials
III. Methods
IV. Result
V. Discussion
VI. Reference

본문내용

V. Discussion

이번 실험은 유전자를 해석하는 방법 중 Southern blot 방법을 이용하는 실험을 하였다. 우선 실험 방법을 간단하게 정리해 보면 ① DNA 추출과 제한효소에 의한 완전 소화 ② 아가로오스 겔 전기영동 ③ 겔 처리(알칼리 변성 및 중화) ④ 전이(transfer)와 DNA 고정 ⑤ 탐침의 표식과 혼성화 반응 ⑥ 막의 세정 ⑦ autoradiography에 의한 검출의 순서로 시행된다. ④과정에서 transfer의 방법에는 2가지가 있다. 첫 번째는 모세관 현상을 이용한 이동(capillary transfer), 두 번째 방법은 진공을 이용한 이동(vacuum transfer)이다. 이번 실험에서는 첫 번째 방법인 모세관 현상을 이용한 이동을 사용하였다. 전이용액은 일반적으로 10x 또는 20x SSC를 이용한다. transfer시에는 여지와 겔 및 막 사이에 기포가 들어가지 않도록 해야 주의해야 한다. 두 번째 방법이 진공을 이용한 이동을 알아보면 DNA나 RNA는 진공을 이용하여 gel로부터 매우 신속히, 그리고 많은 양이 이동될 수 있다. 여러 가지의 진공이동장치(vacuum transfer device)들이 현재 상용으로 제조되고 있으며 진공 공간을 다공성막(porous screen)으로 덮은 후 그 위에 nitrocellulose나 nylon membrane등의 support를 놓고 gel을 놓은 후 진공을 만들어 주는 방식을 취하고 있다. 완충용액은 상부의 reservoir로부터 solid support를 통해 진공공간으로 흐르고 핵산은 gel로부터 유출되어 membrane에 축적되게 된다. 진공을 이용한 이동방법은 모세관 현상을 이용한 이동보다 매우 효과적이며 이동에 소요되는 시간도 매우 짧다. DNA는 염기성 용액으로 부분적인 depurination을 통해 변성된 후 일반적인 gel 두께인 4 5 mm와 1% 이하의 agarose 농도의 gel로부터 30분 이내에 이동하게 된다. 성공적으로 수행되었을 경우 모세관 현상을 이용한 이동 방법에서 얻은 hybridization signal 보다 2배 내지 3배 강한 결과를 얻을 수도 있다.

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/southern_blot.htm