[plant biology] protoplast

소개글

간단하게 실험하는 방법 소개..

목차

Protoplast를 직접 분리해보고, 그들의 특성과 다루는 법을 이해

본문내용

Introduction
1. Suspension Culture
-Callus와 같은 미분화 상태의 세포들을 액체배지에서 증식시키는 배양법
2. Protoplast
-세포벽이 제거된 식물세포를 뜻하는 것으로, 세포들은 기본적으로 (-) 전하에 의해 서로 분리된 상태로 유지, 배양된다.
3. Usefulness of Protoplast
1) Genetic manipulation의 재료
- Parasexual or somatic hybrid : Sexually incompatible종 사이의 교잡종을 구성 (e.g. Pomato)
- Somaclonal variation VS 육종 : 빠른 시간과 적은 공간에서 원하는 형질을 screen가능
- Transformation : Direct uptake or Agrobacterium
2) 연구재료
- 미세구조연구 (e.g. cytoskeleton..), 세포소기관분획용이, 순수type세포들의 생리연구
Materials and Reagents
6일된 cultured tobacco suspension cells

Enzyme solution : 1% cellulase, 0.5% pectinase, 0.5% hemicelluase in CPW9M
- overnight stirring, filtrate with filter paper and 0.22 ㎛ syringe filter.
CPW9M : CPW salts with 9% mannitol
- KH2PO4 27.2, KNO3 101.0, CaCl2H2O 1480.0, MgSO47H2O 246.0, KI 0.16, CuSO45H2O 0.025 mg/L, pH 5.8
CPW21S : CPW salts with 21% sucrose
1% Evans blue 수용액, 5 mg/ml FDA(fluorecein diacetate) in acetone
14 ml round bottom centrifuge tube, hemocytometer, swing-bucket centrifuge, 100 ㎛ steel mesh, slide glass, cover glass.

참고 자료

없음