[식품화학]단백질의 분석

소개글

단백질의 분석에 대한 개요, 방법, 결과 및 고찰 주의사항 기재.

목차

1.단백질의 정량 분석
(1)분광학적 정량
(2)lowry 법
(3)bradford 법

본문내용

3) Bradford법
<개요>
Lowry 정량법에 비하여 간단하고 빠르고, 보다 감도가 높은 방법이며, 반응에 있어서 비단백질에 의한 방해를 덜 받는다. Bradford법은 Coomassie blue G250과 단백질과의 결합에 의한다. Coomassie blue G250은 4종의 다른 ion 형태를 지니며 산성용액에서는 산성의 적색과 녹색 형태가 우세하게 존재하여 각각 470과 650㎚에서 최대 흡광도를 지닌다. 따라서 단백질의 양은 푸른색의 ion형의 양을 측정함으로서 결정되며 통상 595㎚에서 측정한다. 푸른색의 ion형은 단백질의 arginine이나 lysine 잔기에 결합하여 발색하며, 단백질 중의 arginine이나 lysine의 함량에 따라 다소 차이가 있다. 통상 2가지 분석방법에 이용되며, 표준측정법은 10~100㎍의 단백질 정량에 이용된다.

<시료조제>
앞의 분광광도법과 동일하며, 단백질의 농도를 더 희석할 필요가 있다.

<시약 및 기구>
100㎎의 Coomassie blue G250을 50㎖의 95% methanol에 용해시킨 후 100㎖의 85% 인산과 혼합하여 1ℓ로 저용하여 염색약을 제조한다. 염색 용액을 Whatman No. 1. 여과지로 여과한 후 갈색병에 넣어 상온에 보관하면서 사용하며, 수주간 사용할 수 있다. 또는 Bio-Rad, Pierce, Amresco 사로부터 구입하여 사용하는 것이 편리하다.
<방법>
1. 표준측정 방법
① 10~100㎍의 단백질 용액 100uℓ을 시험관에 취한다. 단백질의 농도를 모를 경우 원액, 10, 100 또는 100배 희석액을 취한다.
② 검량곡선을 얻기 위하여 10, 20, 40, 60, 80 및 100uℓ의 단백질 용액(1㎎/㎖ BSA 또는 γ-globulin)을 시험관에 각각 취하고 증류수를 가하여 100uℓ이 되게 한다. 공시험으로 시료 대신에 증류수를 100㎕을 취한다.
③ 증류수 4㎖를 시험관에 가하고 염색시약 1㎖을 시험관에 가하고, 거품이 생기지 않게 흔들어 섞는다.
④ 염색시약을 넣고 5~30분 사이에 595㎚에서 흡광도를 측정하여 표준 검량곡선과 비교하여 단백질량을 계산한다.

참고 자료

없음