[PCR-DGGE]PCR-DGGE기법을 이용한 수소발효 미생물의 동정

소개글

PCR-DGGE기법을 이용하여 수소를 발생시키는 미생물의 해석하는것이다...
수소발효 생물의 DNA를 추출하여 증폭시키는 과정 DNA를 해석하는 방법등에 대하여 제시

목차

1. 연 구 목 적

2. 이론적 배경
2.1 생물학적 수소생산 기술
2.1.1 혐기성 수소발효
2.1.2 수소생산 관련 미생물
2.2 분자생물학적 분석법
2.2.1 DNA
2.2.2 16s rRNA
2.2.3 Poiymerase Chain Reaction (PCR)
2.2.4 Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE)

3. 실헙방법 및 재료
3.1 사용균주와 배양방법
3.2 DNA 추출
3.3 PCR 증폭
3.4 DGGE 분석

4. 기대효과

본문내용

실험방법 및 재료
3.2 DNA 추출
Sample 500μl + sucrose-lysis buffer (0.3M sucrose, 0.7M NaCl, 40mM EDTA, 50mM Tris-HCl;8.5pH) 500 μl 넣은 후 30분 이상 초음파
37℃1시간 배양 후 원심분리 1200rpm 15분 한 후 상등액을 취함
상등액에 SDS(sodium dodecyl sulfate) 1% 100 μl + proteinase K 100 μl + CTAB 50 μl 를 넣는다.
60℃에서 1시간 배양하며 중간마다 회전을 시켜준 후에 실온에서 5분간 방치한다.
P:C:I(phenol:chloroform:lsoamylalchol=25:24:1)을 동일한 양을 넣고 천천히 5~10분간 up-down
12000rpm에서 15분간 원심분리를 하고 상등액을 모은 후 C:I를 동량을 넣고 5~10분간 up-down
12000rpm에서 15분간 원심분리하고 100%에탄올을 1.5 volme과 3M sodium acetate 0.1volume(pH0.5)넣고 up-down후 -20℃~-70℃에서 1~2시간 보관하여 DNA침전
12000rpm에서 15분간 원심분리하여 생등액은 버리고 pellet 만 남긴 후 70% 에탄올로 washing & centri 12000rpm 15분
Pellet만 남기고 상온에서 dry후 멸균된 DW 40 μl 을 넣고 DNA를 녹은후 Rnase A(50 μg/ml)1mg/ml stock 2 μl 첨가 후 36℃에서 배양
전기영동 & O.D값(A260 & A280)측정하여 농도 계산

기대효과
이 연구에서는 혐기성 수소발효 시 수소발효에 영향을 미치는 미생물을 파악할 수 있고, 더 나아가 염기서열까지 분석한다면 혐기성 수소발효 미생물의 종을 규명할 수 있을 것 이라 사료된다. 또한, 반응도 내에 균을 모니터링 함으로서 반응조 내에서 수소가 생성되는 상태를 추측할 수 있을 것으로 판단된다

참고 자료

없음