[생물]제한효소와 DNA전기영동

소개글

title 제한효소와 DNA전기영동이고,
과제 첨부되어있습니다.
제한효소로 DNA를 절단한 후 전기영동을 통해 DNA의 절단 및 양의 확인을 해 보자

목차

title 제한효소와 DNA전기영동
method EcoR1 , BamH1 으로 single cut, double cut, no cut
result
discussion
reference

과제
-EtBr로 염색한 DNA를 UV에서 확인할 수 있는 원리
-loading dye의 역할
-DNA restriction map그려오기

본문내용

Title
제한효소와 DNA전기영동
Purpose
제한효소로 DNA를 절단한 후 전기영동을 통해 DNA의 절단 및 양의 확인 을 해 보자.
Material &
Apparatus
플라스미드 DNA, 제한효소(EcoR Ⅰ, BamHⅠ), 10x buffer, BSA, 아가 로스 젤(EtBr을 첨가한), 1.5ml 튜브, 파이펫, 팁, 증류수, water bath, 6xDNA loading dye(Bromophenol blue(BPB)+Xylene cyanol(XC)+Or ange G), 1kb size marker(표준단편), 50x Tris-acetate/EDTA(TAE)bu
ffer, power supply, gel running kit, UV box(UV lamp+카메라), 비닐장 갑, floater
Method
1. e-tube에 Double cut 과 Single cut 이라고 marking한다.
2. 각 tube 에 DNA와 buffer, 제한효소, BSA, DW의 혼합액(10ml)을 넣는다.
3. 다른 e-tube에 No cut을 marking하고, DNA와 DW를 10ml넣는다.
4. 세 개의 e-tube을 원심분리기에 넣고 spin down시킨다.
5. 위의 세 혼합액을 water bath 37℃에서 50분 동안 반응시킨다.
6. comb 를 제거한 다음 pre-made gel을 전기영동 tank안에 설치하 고, 1mm정도의 두께로 덮을 수 있을 정도로 충분한 양의 전기영동 완충 용액(1x TAE)을 가한다.
7. DNA시료를 6x DNA loading dye와 혼합한 후 pipette을 이용하여 gel의 홈에 marker부터 조심스레 loading한다.
8. Gel tank 뚜껑을 닫고, 100V로 20분간 gel을 running한다.
9. 전기영동이 끝나면, gel을 자외선 하에서 관찰하고 촬영한다.

참고 자료

없음