[생화학]산성 탈인산 가수분해효소의 Purification및 activity 최적pH,최적 온도

소개글

맥아를 이용해 산성탈인산 가수분해 효소를 분리정제하여 효소로 활동도와 최적 온도 pH를 측정해본 생화학 실험입니다.

목차

Ⅰ서론

Ⅱ실험방법

Ⅲ. 시약및 기구

Ⅳ 결과및 고찰

Ⅵ 참고문헌

본문내용

◆ 단백질 정량하는 방법
1) 비우렛반응 (biuret test)
http://yasuar.hihome.com/wordhtm/proteinassay.htm

Biuret method는 알칼리 조건하에서 구리(Cu2+)ion이 단백질의 peptide nitrogen과 peptide에 결합하여, 보라색의 착화합물을 생성하고 540-560nm에 서 흡광을 나타내는 것을 이용하여 단백질을 정량하는 방법이다.
두개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로

2) Lowry test
Lowry등이 고안한 이 단백질 정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5ug/ml정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다.
알칼리 조건에서 구리이온이 peptide bond에 결합하는 Biuret method에 기초를 두고 있는데, Biuret method에서 생성된 Cu+가 inorganic salt mixture인 Folin reagent와 Folin-Ciocalteu 반응을 한다. 이 반응에서는 Foline reagent에 있는 포스포몰리브덴산이 구리에 의해 산 화된 aromatic amino acid에 의해서 heteropolymolybdenum blue로 환원되어 진한 푸 른색을 발색한다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가
‣ lowty test에 의해 540nm에서 흡광도를 측정하고 lowrt standard 기울기에 따라 분획들 에 들어 있는 단백질을 정량할수 있었다. 각 분획들의 희석된 농도와 희석전의 농도를 구 하였는데 희석된 농도는 분획3 희석전 농도는 1번이 가장 농도가 짙었다.

참고 자료

생화학/김명순外 10명/ 형설출판사/1999
실험생화학[개정3판]/한국 생화학회/탐구당
생화학/정동효 外7인/선진문화사/1993
naver 백과사전,지식IN
http://yasuar.hihome.com/wordhtm/proteinassay.htm
Naver백과사전
ko.wikipedia.org/wiki/