[식물]TLC법을 이용한 식물 조직의 색소 분리 및 분광분석법 예비레포트

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목차

1. Spectrophotometer
2. Absorbance
3. Lambert-Beer`s Law
4. Chromatography

본문내용

1. Spectrophotometer
spectrophotometer 원리는 어떤 분자의 흡수 스펙트럼은 주파수(또는 파장)에 따라 각 주파수(또는 파장)에서의 흡수된 복사선의 분율을 그린 것이다. 분광기는 일반적으로 몇 가지 형태를 갖는다.
single-beam spectrophotometer에서의 정량 측정은 용질의 최대 흡수가 일어나는 100% 투과성이 되게 조절되고(Zero 흡수성), 표준 용액의 Cuvette은 시료로 대치하여 측정한다. 그 때 흡광도를 읽어 검량 곡선에서 용액의 농도를 환산한다.
겹 빛살형 기기는 Scanning Spectrophotometer로 주로 사용된다. 광원으로부터 나온 복사선은 단색기를 통과하여 동일한 강도의 두 성분으로 분리된다.

① 자외선-가시광선 분광광도계(UV/VIS Spectrophotometer) - 분자는 UV/VIS을 흡수하면 결합성 전자와 비결합성 전자가 ground state에서 excited state로 전이된 다음, 여러 경로를 거쳐 다시 ground state로 되돌아 가면서 에너지를 방출하게 되는데 이러한 변화를 관찰함으로써 분자의 전자 구조적 성질을 파악한다. 정성분석에서는 분자의 구조분석에 이용되며 순도확인 및 정량분석에도 널리 사용된다.
② 적외선분광광도계(FT-IR; Fourier Transform Infrared Spectrophotometer) - 분자 중에 적외선이 조사(照査)되면 이 중에서 분자 내 원자간의 결합 구조에 따른 고유한 진동에너지 영역의 파장(2.5~25ｕm)을 흡수 후 방출하게 되는데 이러한 변화를 측정한다.
③ 원자 흡광 분광계(Atomic Absorption Spectrophotometer) - 금속 원자를 불꽃 또는 전기로 등에 의하여 높은 온도로 가열함으로써 만들어진 기체 상태의 중성 원자에 적당한 자외선을 쪼여줌으로써 일어나는 복사에너지 흡수 현상을 기초로 한 분석법이다. 이 방법은 극미량의 원소를 정확하게 분석할 수 있다.

2. Absorbance
흡광도(吸光度)·사진밀도(寫眞密度)라고도 한다. 세기 Io를 가진 어떤 빛이 용액층을 통과한 후에 광도가 I가 되면, 그 양은 log10(I0/I)으로 정의된다. 람베르트-베르의 법칙이 성립하는 경우에는 log10(I0/I)＝εcd의 관계가 성립한다. ε은 몰흡광계수, c는 용액의 몰농도, d는 액층(液層)의 두께를 나타낸다. 따라서 ε과 d를 알면 광학밀도 측정으로 농도 c를 결정할 수 있다.
그러나 광학밀도·흡광도 등의 정의는 상당히 애매하며, log10(I0/I)를 흡광도라 하고 흡광도를 d로 나눈 값을 광학밀도라고 하는 경우도 있다. 이 경우 O.D.는 람베르트베르의 법칙이 성립하는 한 εc와 같고, 따라서 용질(溶質)의 농도에 비례한다. 그러므로 어떤 표준상황에서 O.D.를 알면 그 물질의 용액의 O.D.를 측정함으로써 농도를 구할 수 있다.

참고 자료

・http://100.naver.com/100.nhn?docid=19174
・http://blog.naver.com/nyforever98?Redirect=Log&logNo=80017007848
・http://user.chollian.net/~hl5nol/chromato-1.htm#ch_won