생화학+면역학 실험

소개글

생화학 실험입니다.
대장균내에서 플라스미드를 추출하는 과정입니다.

목차

Introduction
실험과정
실험

본문내용

Plasmid DNA 추출의 기본 원리
균체를 파괴시킨 후 원하는 플라스미드 DNA 만을 대장균의 염색체 DNA로부터 분리해 내는 것이 중요하다. 대장균의 염색체 DNA가 플라스미드 DNA 보다 훨씬 크다는 점과 열이나 알칼리 처리 후 얻어지는 염색체 DNA는 여러 군데가 잘려진 선형의 DNA인 반면 플라스미드 DNA는 원형이라는 점을 이용하여 분리한다.
Alkali lysis method
소규모 정제 방법 중 가장 보편적으로 사용되는 방법이다.
기본적인 원리는 세균의 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리해 내는 것이다.
이때 중요한 것이 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 플라스미드 DNA를 구분해 내는 것이다.
1. 세포벽을 깨어준다. 이때 세포막은 유지되도록 한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다.(때에 따라서 lysozyme을 쓰기도 한다.)
2. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chrosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 용액에 DNA를 노출시킨다. SDS라는 변성제가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 된다. 이때 바로 alkali용액에 노출된 DNA는 모두 변성되어 진다. 그러나 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 그다지 심각하게 변성되지 않는다.
3. pH를 급격히 7.0까지 복구 시키면 크기가 작고 supercoiled 형태를 유지 하고 있던 플라스미드 DNA는 비교적 renaturation이 잘 되지만 chromosomal DNA 는 renaturation되지 못 하고 엉기게 된다. 이렇게 엉긴 chromosomal DNA는 원심분리로 제거하며 상층 액에는 플라스미드 DNA가 포함되어 있다.

참고 자료

없음