[미생물학 ]형광검출법에 의한 미생물의 확인(FISH, Fluorescent In Situ Hybridization)

소개글

형광검출법에 의한 미생물 확인 실험으로 형광현미경에 대한 자세한설명과,
FISH 즉 형광동소보합법의 실험방법, 미생물 계통도, FISH용 Probe, FISH 반응조건, 실험결과, 고찰등으로 이루어진 완벽한 실험 레포트 입니다.

목차

8-1. 16S rRNA를 이용한 미생물의 분리
8-2. 형광현미경(Fluorescebce Microscope)
8-3. 형광동소보합법(Fluorescent In Situ Hybridization, FISH)
1. 실험의 목적
2. 실험의 원리
3. FISH 실험에 사용한 미생물 계통
4. FISH용 Probe
(1) Random Primed Labeling과 Nick Translation
(2) Hapten 혹은 Fluorescein Labeled Probe의 준비
(3) Probe preparation
5. FISH의 반응조건
6. 실험방법
7. 실험결과
8. 고찰
(1) 염색체 수적 이상 (aneuploidy)의 검색
(2) 염색체 구조적 이상의 검색
(3) 미세결손의 검색
(4) Marker Chromosomes
(5) 성 판정
(6) Gene Amplification
(7) Comparative Genomic Hybridization
(8) Extended Chromatin Fiber FISH
8-4 참고문헌 / SITE

본문내용

8-1 16S rRNA를 이용한 미생물의 분리
생물의 분류에 있어서 유전자를 이용하는 방법의 대표적인 것이 ribosome에 있는 RNA의 염기서열을 비교하는 것이다. 생물체의 대사는 효소에 의한 반응이며, 효소는 단백질로 구성되어 있다.
이러한 단백질을 합성하는 기구가 ribosome으로서 세포의 대사와 직접적으로 연관되어 있다고 할 수 있다. ribosome 안에는 rRNA가 들어있는데 생물의 각 종마다 진화의 계통에 따른 특징을 갖고 있다. 원핵세포인 세균의 ribosome은 크기에 따라 5S, 16S, 23S의 세가지를 갖는데 이중 16S rRNA가 적절한 정보량을 갖고 있어 분류에 이용된다. 16S rRNA는 약 1,500base의 길이를 갖고 모든 세균이 동일한 부분과 세균의 그룹마다 공통적인 부분, 그리고 각 종마다 서로 다른 부분을 모두 갖고 있다. 이들 각 부분을 적절히 이용한다면 특정 종의 확인 뿐 아니라, 원하는 그룹을 선택적으로 확인할 수 있다. 이처럼 rRNA의 염기서열에 기초한 분류방법은 배양이 필요 없으며, 선택적인 probe의 설계가 가능할 뿐 아니라 진화의 정도에 따른 세균간의 유연관계를 분석할 수 있기 때문에 오늘날 가장 신뢰 할 수 있는 세균의 확인 방법으로 사용되고 있다.

8-2. 형광현미경(Fluorescebce Microscope)
형광현미경에는 자외선(ultraviolet light) 범위의 광파를 매우 강하게 방사하는 수은등(mercury lamp)과 같은 자외선 발생장치와 몇 가지 여과기(filter), 즉 열 흡수 여과기(heat absorbing filter), 활성여과기(active filter, excitation filter), 방사여과기(emission filter, barrier filter)등이 장착되어 있다. 시료에 자외선을 쏘였을 때 파장이 긴 가시광선인 형광(fluorescence)을 발하는 물질이 있거나 또는 시료의 어떤 물질에 형광염로(fluorescent dye)를 인위적으로 표지시켜 형광을 내도록 함으로써 그 물질의 소재를 관찰 할 수 있다. 형광현미경 하에서 이와 같은 형광물질을 여과기 잆이 검경하게 되면 비형광성 부분을 통과한 자외선도 함께 대물렌즈를 통하여 대안렌즈에 이르기 때문에 이 비가시광선이 눈을 상하게 한다. 따라서 표본을 관찰하거나 사진 촬영시에는 대안렌즈의 아래에 적절한 여과기를 삽입시켜야 한다.

참고 자료

최봉종, 유성한, 1998, 수질조사 및 분석, 서울, 동화기술 p88.
이동호외 2명, 1999, 임상 분자 생물학, 서울, 펴냄 홍, pp273~285.