세포증식 실험을 위한 동물세포배양 (MTT cell assay)

소개글

오늘날 생명과학 분야에서 세포배양은 필수적인 요소가 되었다. 본 자료는 동물세포배양의 기초적 도입으로 안내하기 위해 작성되었으며, 실험실 연구자로써 처음 세포관련 실험을 진행하거나 더 상세한 이해 및 흥미를 위한 중요한 개념을 습득하고자 하는 연구자들에게 적합할 것입니다.

목차

Animal cell culture for the proliferation test (MTT cell assay)

Introduction
What is Cell and Tissue Culture?
What is MTT assay?
Materials
Experimental Procedure
References

본문내용

Introduction
오늘날 생명과학 분야에서 세포배양은 필수적인 요소가 되었다. 본 자료는
동물세포배양의 기초적 도입으로 안내하기 위해 작성되었으며, 실험실 연구자로써 처음
세포관련 실험을 진행하거나 더 상세한 이해 및 흥미를 위한 중요한 개념을 습득하고자
하는 연구자들에게 적합할 것이다.
What is Cell and Tissue Culture?
조직배양은 동물이나 식물로부터 유래된 조직이나 기관, 세포를 채취하고 그것들에
적합한 인공환경으로의 순차적 배치를 일컫는 용어이다. 그리고 연구하는 목적과 부합되는
모든 기관이나 손상 받지 않은 기관 일부의 연속적 배양이 기관배양이다. 배양하는
동안이나 전에 기관으로부터 세포가 채취되었을 때 이웃세포와의 관계에서 분열되어
배양시키는 경우를 세포배양이라고 한다.
What is MTT assay?
MTT assay는 세포의 증식을 측정하기 위한 실험실 시험법으로써 표준 비색분석법
(standard colorimetric assay)이라고 할 수 있다. 생명과학분야에서 세포의 증식을 정확하고
신속하게 결정할 수 있는 방법은 기본적 기술이다. 일반적으로 hemocytometer를 이용하여
생존세포수를 세거나 광학밀도 (optical density)를 측정하는 방법이 사용되지만 많은 양을
측정 시 시간과 노력이 필요이상으로 요구되고 부정확한 결과를 가져올 수 있다. 이를
대체하기 위해 개발된 MTT assay는 살아있는 세포의 미토콘드리아 탈수소 효소작용
(dehydrogenases)에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyl-tetrazolium bromide, Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)를 자주색을 띄는
비수용성의 MTT- formazan 결정으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는
검사법으로써 신속하고 정확하게 많은 양의 세포 증식거동을 측정할 수 있다. 자주색
결정은 DMSO에 용해되고 흡광도 (Optical Density)는 540nm의 파장에서 최대가 되며, 이
파장에서 측정된 흡광도는 살아있는 세포의 수와 직선적인 상관관계를 나타내게 된다.

참고 자료

1. John A. Ryan, Ph.D., Corning Incorporated Life Sciences.
2. FLORIAN M. FREIMOSER, CLAUDE A. JAKOB, MARKUS AEBI, AND URS TUOR, "The MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5 -Diphenyltetrazolium Bromide] Assay Is a Fast and Reliable Method for Colorimetric Determination of Fungal Cell Densities", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Vol. 65, No. 8, 3727–3729 (1999).