Preparation of Plasmid DNA by Boiling lysis and Alkaline lysis

소개글

Plasmid DNA를 Boiling lysis와 Alkaline lysis with SDS를 통해 분리 정제하여 확인하는 실험의 실험보고서 입니다.

목차

Object
Introduction
method
result
discussion

본문내용

2) Introduction

플라스미드란 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA의 고리 모양인 유전자이며 염색체외 DNA 분자로서 독립적 복제 능력을 가지는 유전인자들의 집합체다. 플라스미드는 파지와 더불어 분자생물학, 분자유전학 연구에 필수적 도구로 쓰여 왔는데 실제에 있어 플라스미드와 파지는 대단히 밀접한 관련이 있다. 유전자 재조합 기술에 있어 가장 중요한 요소인데 대부분의 운반체가 플라...

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3) Method

Preparation of plasmid DNA by Alkaline Lysis with SDS

1. Inoculate 2 ml of rich medium(LB) containing the appropriate antibiotic with a single colony of transformed bacteria. Incubate the culture overnight ot 37℃ with vigorous shaking.

2. Pour 1.5 ml of the culture into a microfuge tube. Centrifuge at maximum speed for 30 seconds at 4℃ in a microfuge. Store the unused portion of the original culture at 4℃

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Plasmid DNA preparation by Boiling lysis.

1. Spin 1.5ml or freshly saturated culture for 30sec in a microfuge
2. Remove supernatant
3. Resuspend the pellet in 300㎕ of STET by vortexing
4. Add 4㎕(50mg/ml) lysozyme, and add 1㎕ of RNase A(10mg/ml)
5. Heat the tube at 100℃ for 2min
6. microfuge for 5min at RT
7. Scoop out the pellet with a toothpick
8. Add 300㎕ of NH4Ac/ I-PrOH (2.5M NH4Ac / 75% I-PrOH)
9. Mix(invert 5 times) and spin for 5min at RT
10. Remove the supernatant by aspirator
11. Rinse the pellet with 300㎕ of 70% EtOH

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참고 자료

GENETICS, Brown, CHAPMAN & HALL, 2001
유전학실험, 한국유전학회, 아카데미서적, 1989
유전학, 정원복, 동아대학교출판부, 2003