Agrobacterium을 이용한 식물체 형질전환

소개글

Agrobacterium을 이용한 식물체 형질전환,,,,에 대한 실험보고서
실험과정, 실험 결과, 고찰등등,,사진도 첨부,

목차

1. 실험 일자
2. 실험 목적
3. 실험 방법 및 순서
4. 실험결과
5. 고 찰

본문내용

1. 실험 일자 : 2005년 11월 21일 ~ 11월 28일 (월)
2. 실험 목적 : Agrobacterium을 이용해 외래의 식물체(참깨)를 형질전환 시킨다.
3. 실험 방법 및 순서

1) MS medium 만들기
① stock I 5㎖/L + stock II 5㎖/L + stock III 5㎖/L + stock IV 5㎖/L 넣고 Sucrose 3%~5% 넣어 1차 증류수를 넣어 배지의 양을 맞춤.
② pH 5.7로 맞춤.
③ 고체 배지는 agar를 0.8% 농도 넣어줌.
④ 121℃, 15분간 고압멸균.
⑤ plate에 50㎖ 붓고, Clean bench에서 굳힘 → 고체 MS배지

2) 참깨 파종
① 참깨종자를 0.5% 소독액(Dichloro-isocyanuric acid)에서 2시간동안 소독
② 소독 후 1차 멸균수로 3번 씻어내고, MS 고체배지에 뿌림
③ 26℃ growth chamber(생장상)에서 약 일주일 키움

3) A. rhizogenes(containing pMOG413 phytase expression plant binary vactor) 감염
① 주사기 바늘이용. pMOG413으로 형질 전환된 A. rhizogenes을 묻혀 seedling. 줄기상단부위에 상처냄.
② Agrobacterium을 감염시킨 식물체를 항생제 넣지 않은 MS agar 배지에 넣고 22℃ 암상태로 2~3일 배양(coculture)

4) 형질 전환된 Hairy root의 유도, 선별 및 배양
① coculture후 참깨 seedling을 100㎕/㎖ kanamycin을 함유한 MS배지에 옮겨 1~2주간 28~30℃에서 배양시켜 hairy root를 유도
② 줄기로부터 유도된 hairy root를 잘라 100㎕/㎖ kanamycin을 함유한 MS palte 배지에 옮겨 28~30℃에서 4주간 배양
③ 200㎖ MS 배지에 hairy root 넣고 30℃, 암상태, 100rpm, 5주간 배양

참고 자료

자작글,,,