미생물 형질전환(transformation) 실험보고서

소개글

미생물 형질전환(transformation) 실험보고서 입니다.

목차

(1) 미생물 형질전환(Transformation)의 원리

(2) 실험재료

(3) 실험방법
1. competent cell 제조
2. transformation 방법

(4) 실험결과

(5)실험 고찰

본문내용

(1) 형질전환(Transformation)의 원리
형질전환(transformation)이란 외부로부터 주어진 DNA에 의해 개체 또는 세포의 형질이 유전적으로 변화하는 현상을 말합니다. 특히 박테리아 세포안으로 plamid DNA를 넣어주어 형질전환 시킬 때, E.coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 후에 열 충격(heat shock)이나 전기 충격을 주어 이루어지게 됩니다. 이렇게 E.coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 세포를 competant cell이라고 합니다. 이러한 조건을 이용하여 유전형질을 변화시키는 것이 미생물의 형질전환(transformation)이라고 합니다.

박테리아는 cell wall을 가지기 때문에 이를 흐물흐물하게 만들어 외부 DNA가 cell 내로 쉽게 들어가도록 해준 상태에서, heat shock을 주어 plamid DNA가 cell내로 들어가게 하여 형질전환을 하게 만듭니다.

(2) 실험재료
1. Ligation된 DNA
2. Control로 사용할 plasmid DNA (pBR 322)
3. Competent cell (heat shock용)
4. LB ampicillin plate

(3) 실험방법
1. competent cell 제조
1) 3ml LB에서 overnight culture한 E. coli DH5α strain을 25 ml LB (in 250 ml
flask)에 1/100 dilution, 접종하여 37℃ incubation한다.
2) 배양액을 5,000 rpm, 5min, centrifuge하고 상등액은 버린 후, pellet에 0.4ml
volume의 차가운 TFBI buffer를 가하고 suspension시킨다.

참고 자료

없음