유전자 조작 실험 1, Plasmid 및 DNA의 순수분리와 재조합 DNA 분자 제조
- 최초 등록일
- 2006.11.29
- 최종 저작일
- 2006.01
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소개글
유전공학에서 사용되는 기초실험인 plasmid DNA의 분리기술을 습득하고, 재조합 DNA 분자의 제조방법을 이해한다.
목차
1. 실험제목
2. 실험목적:
3. 실험원리
4. 실험방법
5. 참고문헌
본문내용
1. 실험제목: 유전자 조작 실험 1, Plasmid 및 DNA의 순수분리와 재조합 DNA 분자 제조
2. 실험목적: 유전공학에서 사용되는 기초실험인 plasmid DNA의 분리기술을 습득하고, 재조합 DNA 분자의 제조방법을 이해한다.
3. 실험원리
☐plasmid preparation
-플라스미드를 정제한다.
E.coli는 genomic DNA이외에 독립적으로 복제가 가능한 Plasmid DNA를 가질 수 있는데 이러한 플라스미드를 가진 E.coli로부터 플라스미드DNA를 분리 정제하는 과정.
☐plasmid
-플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외의 작은 원형의 DNA분자 입니다. 형태는 원형이고, 이중 나선으로 되어 있으며, 박테리아의 유전자와는 독립적으로 분열할 수 있는 능력을 가지고 있습니다. 그러한 이유로 유전자 클로닝을 위한 벡터로 많이 사용되는 것 중 하나입니다. 벡터란 유전자 클로닝시에 우리가 원하는 유전자를 숙주 세포안으로 이동시켜 그 안에서 다량으로 복제 가능하도록하는 일종의 운반체를 말하며, 플라스미드는 그를 위한 조건을 가지고 있습니다. 우선 자가 복제를 위한 복제 기점 (origin of replication)을 가지고 있으며, 유전자의 발현, 즉 삽입된 유전자의 전사를 유도하는 promoter, 나중에 세포 배양에 의한 대량 생산후에 플라스미드가 들어간 세포와 그렇지 않은 세포를 구별해 내기위한 selective marker, 그리고 숙주안에서의 copy number 를 조절하는 replicon, 그리고 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있는 insertion site 등을 가지고 있습니다. insertion site는 제한 효소에 의해 잘려질 수 있는 부위인데요. 거기로 우리가 복제를 원하는 유전자를 삽입할 수 있습니다. 플라스미드와 항생제의 관계를 selection 에 있습니다. 유전자 클로닝 시에 플라스미드가 들어간 숙주세포와 그렇지 않은 세포를 가려낼 때 이용하는 것 중 하나가 플라스미드가 가지는 항생제 저항성 유전자 입니다. 플라스미드는 한개 또는 2개 이상의 항생제 저항성 유전자를 가집니다.
참고 자료
http://blog.naver.com/kuraa.do?Redirect=Log&logNo=80009706622
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=1399050
http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=795