Immunocytochemistry
- 최초 등록일
- 2006.11.30
- 최종 저작일
- 2006.05
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소개글
서울대 생명과학실험1 레폿입니다. A+받았어용~
목차
I. Result
II. Discussion
III. Discussion
IV. Reference
본문내용
II. Discussion
‣ 3% BSA와 0.5% PBST solution이 하는 역할에 대하여 조사해본다.
BSA는 ELISA, blotting, immunocytochemistry등에 응용되는 diluent 또는 blocking agent로 알려져 있다. 유래는 beef industry의 by-product라고 한다. 용도는 restriction enzyme 또는 우리가 사용했던 1‘ 또는 2’ antibody가 cell component나 reaction material등에 non-specific하게 binding 하는 것을 방지하고(blocking) stable하게 해주는 효과가 있다고 한다. 예를 들어 BSA는 cell coverslips, cell membrane, cell organelle등에 침착되므로 BSA가 있는 표면에 antibody가 붙지 않게 하는 것이다. 그러므로 우리는 antibody binding의 specificity를 확보해 실험의 fidelity를 높이기 위해 사용한다고 생각할 수 있다.
0.5% PBST solution은 phosphate buffered saline에 Trition X-100이 첨가된 용액으로서 PBS는 washing solution으로 사용되지만 Triton X-100은 hydrophilic polyethylene oxide group 과 hydrocarbon(lipophilic) group [ 4-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-phenyl group ]으로 구성된 nonionic detergent이다. detergent의 영향으로 cell membrane의 permeability가 높아서 cell 내로 antibody와 DAPI가 incorporation 될 수 있는 것이다.
참고 자료
1. http://en.wikipedia.org/wiki/Triton_X-100, Bovine_serum_albumin
2. Molecular Cloning Sambrook & Russell CSHLPress volume 3 17.36, 17.44-45
3. How to use GFP-tagged proteins in cell biologyby Namboori B. Raju
www.fgsc.net/neurosporaprotocols/ How%20to%20use%20GFP-tagged%20proteins%20in%20cell%20biology.pdf