[자연과학]TRANSFORMATION의 원리

소개글

transformation의 기본원리와 방법을 소개 하였습니다.

목차

1. E. coli transformation
2. Yeast transformation

본문내용

1. E. coli transformation

(1) 원리

E. coli는 linear 또는 circular DNA를 받아들일 수 있다. 이러한 과정을 transformation이라 하며 다음과 같은 단계를 거쳐 이루어진다.

E. coli cell이 DNA를 받아들일 수 있는 상태 (competent)로 만들어 주기 위해 E. coli cell을 Ca++ 과 같은 multivalent ion의 존재 하에 0℃에서 incubation한다. 이때 양이온(Ca++)은 E. coli 세포막에 존재하는 lipid의 negatively charged phosphate와 complex를 이룰 것으로 추정된다. 낮은 온도는 세포막(cell membrane)을 응고시켜 charged phosphate의 분포를 안정화하여 양이온(Ca++)에 의하여 효과적으로 shield되게 하여준다. 이때 적절한 쇼크를 가하게 되면 DNA가 효과적으로 세포 안으로 들어가게 된다.

첫째로, 37-42℃로 heat shock(열쇼크)를 가하면 E. coli membrane 내외의 열에 의해 일시적인 불안정 (thermal imbalance)한 상태가 되어 DNA가 세포안으로 빨려들어가게 된다.

둘째로 electroporation에 의한 transformation으로 electric charge를 E. coli cell에 순간적으로 가하여 이때 생긴 구멍(pore)를 통해 DNA를 세포안으로 넣는 방법이 있다.

host cell나 electric charge로 들어간 DNA는 ampicillin등 항생제에 대한 내성을 가진 유전자 (beta lactamase를 coding하는 유전자)가 포함된 plasmid를 사용하여 ampicillin등 항생제가 포함된 배지에서 선발하여 확인한다.

(2) materials

▶ strain: E. coli DH5alpha : lacZ△M15, recA1

▶ plasmid: pUC9 (ampr) pHNT (pUC vector의 derivative로 ampicillin 내성유전자와 GFP 유전자를 포함하고 있다)

참고 자료

없음