GPC기법을 이용한 단백질 분리 및 미지시료의 분자량 측정

소개글

GPC column이 장착된 FPLC를 이용하여 단백질 및 미지시료를 분석하는 실험입니다.
FPLC와 GPC에 대한 내용에 집중하여 작성한 레포트 입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험장치 및 실험방법
4. 결과 정리

본문내용

2-5 FPLC(Fast Protein Liquid Chromatograpy)의 원리
FPLC는 HPLC와 동일한 원리로 운영되며, 이동상이 액체 (주로 수용상 완충액)이고 분석물질은 주로 단백질과 같은 고분자전용 액체 크로마토그래피이다. HPLC가 소량의 시료를 고압에서 분리함에 비하여 FPLC는 수백 mL에 상당하는 다량의 시료로부터 다양한 column을 이용하여 고분자 물질을 분리, 분취하는 목적이 있다. 고압의 펌프를 이용하여 시료를 빠른 유속으로 컬럼을 통과시키면 컬럼내의 bead와 시료의 물질들과의 친화도의 차이에 의하여 시료가 분리된다. 이렇게 분리된 단백질은 UV검출기를 이용하여 검출하며, Fraction collector로 분획을 실시하여 원하는 시료를 분취할 수 있고, Phast system을 이용하여 얻은 시료를 더 분석할 수 있다.

2-5-1 FPLC(Fast Protein Liquid Chromatograpy)주요 성능
- 고분자 분석을 위한 액체크로마토그래피
- UV 검출기
- Gradient elution 기능
- Fraction collector를 이용한 분취 기능
- Phast system을 이용한 전기영동 분석기능

2-5-2 FPLC(Fast Protein Liquid Chromatograpy)용도
- 단백질의 분리정제
- Ion exchange, Gel permeation, Hydrophobic, Isoelectrofocussing 가능
- 단백질의 분자량 측정
- 단백질의 SDS 전기영동 및 Native 전기영동
- 등전점 크로마토그래피를 통한 등전점 결정
- 전기영동 후 Western 분석 가능

2-5-3 FPLC의 사용목적
- 단백질의 분리 및 정제를 아주 빠른 시간과 작은 양으로 할 수 있다.
- 빠른 시간에 희석되는 손실이 비교적 적게 투석이 가능하다.

참고 자료

없음