[공학]E.coli의 DNA 추출방법

소개글

대장균으로 부터 plasmid DNA를 추출하는 방법을 간단하게 몇가지 정리한 내용입니다.

목차

E.coli의 DNA 추출방법
① 전자동 핵산 추출정제 장치 이용
② 크기에 기초한 분리
③ 구조에 기초한 분리
④ EtBr-CsCl 밀도 기울기 원심분리법

본문내용

① 전자동 핵산 추출정제 장치 이용
추출원리 : Chaotropic ion의 존재하에서 실리카gel에 핵산이 흡착하는 원리를 응용한 추출 정제 방법이다. 감압식 여과에 의해 시료로부터 불순물을 분리하고, 핵 산을 회수한다.

② 크기에 기초한 분리
세포 파괴를 한 후 sucrose 존재하에서 EDTA와 lysozyme처리를 한다. 그리고 Triton X-100과 같은 비이온성 세제를 첨가하여 세포를 용해시킨다. 그리고 원심분리를 하면 plasid DNA로 이루어진 cleared lysate가 남게 된다.
이 방법은 약간의 genomic DNA가 남기 때문에 순수한 plasmid를 얻기가 어렵다. 더구 나 plasmid 자체가 큰 분자라면 세포 단편과 함께 침전이 될 수도 있다. 그러므로 오염 물을 제거하는 다른 방법을 고려해야만 한다.


③ 구조에 기초한 분리
세포 추출물에 NaOH를 첨가하여 pH가 12.0~12.5가 되도록 한다. 그러면 unsupercoiled DNA의 수소결합이 깨지게 되어 이중 나선 구조가 풀리게 되고 두 개의 polynucleotide 사슬이 풀리게 된다. 불용성 물질이 원심분리에 의해 뭉쳐지면 순수한 plasmid DNA가 상등액에 남게 된다.

④ EtBr-CsCl 밀도 기울기 원심분리법
고속으로 CsCl 용액을 원심분리함으로서 밀도 기울기가 생성된다.

참고 자료

gene cloning