Western blot 이론

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Western blot에 관한 자세한 설명입니다.

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본문내용

western blot이란 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 기법으로서 찾고자 하는 단백질에 대한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정단백질의 존재여부를 밝혀낸다. immunoblot이라고도 불리는 western blot의 기본 원리는 cell extracts로부터 특정 단백질을 찾기 위해서 먼저 gel electrophoresis를 이용하여 크기별로 분리해낸다. 단백질을 순수하게 크기별로 분리해 내기 위해서는 단백질의 단위 질량당 charge와 3차원 folding 구조를 모두 같게 해줘야 한다. 이런 이유로, 단백질은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)를 수행한다. 이는, SDS를 detergent로서 이용하여 단백질을 모두 단위 질량당 같은 정도의 negative charge를 띠게 해줘서, 각 protein간의 전하 차이를 제거하며, 동시에 folding 구조를 깨뜨려서 형태의 차이로 인한 이동 속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 이러한 처리를 가해준 단백질은 순수하게 크기에 해당하는 정도로 - electrode로부터 + electrode를 향하여 이동하게 된다. 이렇게 단백질을 크기별로 분리해낸 후에, 단백질을 membrane으로 transferring 시킨다. 이 과정에서도 역시 단백질의 전하 특성을 이용하여, - electrode 쪽에는 gel을, + electrode 쪽에는 membrane을 놓게 된다. 이렇게 하면, 크기별로 분리된 단백질이 그대로 membrane으로 이동하게 된다. 이제는 membrane 상에서 우리가 관심을 갖는 대상 단백질에 대한 항체를 이용하여 그 단백질을 찾을 수 있다.

참고 자료

생물학 관련 책
인터넷