Plasmid DNA의 분리 및 정제방법

소개글

수 있다.

목차

Plasmid DNA의 분리 및 정제방법
<분리방법>
<정제방법>
<주의할점>
<주의 할점>
<정리>

본문내용

<분리방법>
Minipreps of plasmid DNA
bacterial cells로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법은 대단히 많지만 성공률과 속도를 생각하여 세가지 방법으로 소개하면 Alkaline lysis prep, boiling method 그리고 lithium-based procedure 이다.
① Alkaline lysis miniprep
alkaline lysis procedure(Bimboim, Doly, 1979)은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법이다. Plasmid DNA는 plasmid을 지니고 있는 bacteria에서 적은 양의 배양으로 분리될수 있다. Bacteria는 sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균되어 진다(여기서 SDS는 bacterial proteins을 변성시키며 NaOH는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 변성시킨다). 다음 potassium acetate를 첨가하여 혼합액을 중성화시키는데 이것은 covalently closed plasmid DNA를 빠르게 reanneal 시킨다. chromosomal DNA와 bacterial proteins의 대부분은 침전되며(SDS는 potassium과 화합물을 이룬다) 침전물은 원심분리로서 제거할 수 있다. plasmid DNA는 상등액에 남아있게 되고 ethanol precipitation으로 집중시킬 수가 있다.
Material과 Procedure는 아래와 같다.

참고 자료

없음